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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 单酶切 总是连不上
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yu123400

木虫 (正式写手)

[交流] 单酶切 总是连不上

载体10k.目的片段5k，只能单酶切KpnI.用的promega的T4连接酶，一般直接4℃连接过夜，好多次了，就是连不上，感觉好多都是载体自连，求助大神指点一下！！

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1楼 2017-01-20 15:36:27
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kang7650

银虫 (正式写手)
★
yu123400(金币+1): 谢谢参与
不懂

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3楼2017-01-20 15:48:17
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yu123400

木虫 (正式写手)
一般37℃酶切2.5小时

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2楼2017-01-20 15:42:39
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linglingys

新虫 (小有名气)
★ ★
yu123400(金币+1): 谢谢参与
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-21 06:45:03
切久点，切载体以及插入片段切6个小时左右。本人SfiI单酶切就是这么做出来的

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12楼2017-01-20 16:15:33
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
单酶切，载体去磷酸化，回收，连接时多加载体，使载体与目的片段的比例加大。
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13楼2017-01-20 21:41:39
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小网虫v5875楼
2017-01-20 15:51   回复  
yu123400(金币+1): 谢谢参与
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吸血人狼城6楼
2017-01-20 15:51   回复  
yu123400(金币+1): 谢谢参与
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ajingne19楼
2017-01-20 16:07   回复  
yu123400(金币+1): 谢谢参与
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