| 查看: 1487 | 回复: 11 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者0220zy将赠送您 88 个金币 | ||
[求助]
小鼠抗体重链的引物无法扩增出目的基因，急求解决方案已有2人参与
|
||
|
从文献中找的小鼠抗体重链的引物3条，找生工进行合成。Taq聚合酶是Takara的普通的，不是高保真的。 轻链一次就扩增出目的基因，重链一直扩增不出来。尝试了好多退火温度（55.58.60.62 结果如图.），延伸温度72，延伸时间42s和1min20s，循环数在30和35，电泳显示二聚体很多。 变性94℃30s，退火不同温度都是30s，延伸72℃有42s有1min20s的，循环30次的和35次的 现在怀疑是不是引物有问题，因为不是自己设计的，硕士论文中的重复性应该不高。 用cDNA模板跑内参引物，效果很好，条带很清晰很亮，模板应该没有问题。 看电泳图有些能隐约看到700bp处出来了条带，但是都不是很明显。 重链5‘Tm值61.56，GC为59.09； 重链3’第一条引物 Tm值62.70，GC为46.67 重链3’第二条引物 Tm值65.35，GC为59.26 重链3’第三条引物 Tm值63.07，GC为53.33 真的不知道该怎么办了。求大神支招啊，建议怎么设计反应条件！！！不胜感激  1.jpg  2.jpg  3.jpg  4.jpg@youlinglyw@wizardfan |
回复此楼» 猜你喜欢
球磨分散剂
已经有4人回复
-
阴阳离子交换剂！！！！
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有94人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有11人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有10人回复
-
酸酐或者羧酸酰氯化
已经有15人回复
-
酚羟基接入磷酸，磷酸酯化
已经有26人回复
-
土壤中可溶性有机碳种类
已经有1人回复
0220zy11楼2017-01-19 23:03:55
2楼2017-01-18 01:17:10
3楼2017-01-18 08:05:30
jurkat.1640
铁杆木虫 (文坛精英)
- MolEPI: 1
- 应助: 889 (博后)
- 金币: 14935.4
- 散金: 1573
- 红花: 112
- 沙发: 18
- 帖子: 13433
- 在线: 1976.1小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
4楼2017-01-18 10:02:09
5楼2017-01-18 12:21:44
6楼2017-01-19 21:35:22
xy1232123
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 206.5
- 帖子: 37
- 在线: 14.1小时
- 虫号: 1661165
- 注册: 2012-03-03
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
7楼2017-01-19 21:56:32
|
放假前最后一次实验最出来了，还是94℃变性30s，退火59℃30s，延伸72℃增加到一分半，引物浓度变成1uM，上下游各加1ul。电泳结果还是挺好的！证明引物没问题 发自小木虫Android客户端 |
8楼2017-01-19 22:44:21
9楼2017-01-19 22:44:41
10楼2017-01-19 22:46:20
