| 查看: 2137 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
小鼠抗体重链的引物无法扩增出目的基因，急求解决方案 已有2人参与
|
||
|
从文献中找的小鼠抗体重链的引物3条，找生工进行合成。Taq聚合酶是Takara的普通的，不是高保真的。 轻链一次就扩增出目的基因，重链一直扩增不出来。尝试了好多退火温度（55.58.60.62 结果如图.），延伸温度72，延伸时间42s和1min20s，循环数在30和35，电泳显示二聚体很多。 变性94℃30s，退火不同温度都是30s，延伸72℃有42s有1min20s的，循环30次的和35次的 现在怀疑是不是引物有问题，因为不是自己设计的，硕士论文中的重复性应该不高。 用cDNA模板跑内参引物，效果很好，条带很清晰很亮，模板应该没有问题。 看电泳图有些能隐约看到700bp处出来了条带，但是都不是很明显。 重链5‘Tm值61.56，GC为59.09； 重链3’第一条引物 Tm值62.70，GC为46.67 重链3’第二条引物 Tm值65.35，GC为59.26 重链3’第三条引物 Tm值63.07，GC为53.33 真的不知道该怎么办了。求大神支招啊，建议怎么设计反应条件！！！不胜感激  1.jpg  2.jpg  3.jpg  4.jpg@youlinglyw@wizardfan |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有125人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
5楼2017-01-18 12:21:44
2楼2017-01-18 01:17:10
3楼2017-01-18 08:05:30
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- MolEPI: 1
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17445.2
- 散金: 1682
- 红花: 121
- 沙发: 41
- 帖子: 14593
- 在线: 2201.3小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
4楼2017-01-18 10:02:09
