| 查看: 1457 | 回复: 12 | |||
[求助]
请问验证cds全长序列设计引物(cDNA模板)，后二十碱基几乎没有GC怎么办
|
|||
|
为了设计这个引物我查了好多资料，pp5也下了学了但是验证cds的引物基本上只有前二十和后二十这种设计法，但我下游引物用了最后二十四个碱基CG含量才大概20%，退火温度五十都不到，跑出条带做了连接转化但结果都不是目的基因。有人说用utr区设计，但是我5‘utr只有十五个已知碱基，是需要先做个5race吗？或者前辈们有什么别的方法？求指点谢谢 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有70人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
MAS_rice
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 11486.2
- 散金: 100
- 红花: 22
- 帖子: 1246
- 在线: 99.6小时
- 虫号: 3859702
- 注册: 2015-05-09
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
4楼2017-01-04 22:12:15
|
我比过一次也让师姐比过一次，两个都是什么菌的基因序列，所以我想是不是特异性引物太差根本没克出我要的基因，升高退火温度就几乎没有条带，降低退火还会在500bp左右出现一堆别的条带。。。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-01-04 23:09:10
MAS_rice
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 11486.2
- 散金: 100
- 红花: 22
- 帖子: 1246
- 在线: 99.6小时
- 虫号: 3859702
- 注册: 2015-05-09
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-06 07:45:02
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-06 07:45:02
|
能扩出来应该可以用吧，要不然你把这个扩出来的前段连个T载，再测序看看是不是目的前段 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-01-03 23:20:27
3楼2017-01-04 15:41:08
MAS_rice
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 11486.2
- 散金: 100
- 红花: 22
- 帖子: 1246
- 在线: 99.6小时
- 虫号: 3859702
- 注册: 2015-05-09
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
6楼2017-01-05 20:20:29
我那个是一个植物fes基因，NCBI上没有一样的但是有别的植物的我看了看都是调控hsp70的照理说是没问题的，但就是全长去克就出不来，有没有别的设计引物的方法啊 发自小木虫Android客户端 |
7楼2017-01-05 23:48:07
MAS_rice
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 11486.2
- 散金: 100
- 红花: 22
- 帖子: 1246
- 在线: 99.6小时
- 虫号: 3859702
- 注册: 2015-05-09
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
8楼2017-01-06 21:25:08
MAS_rice
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 11486.2
- 散金: 100
- 红花: 22
- 帖子: 1246
- 在线: 99.6小时
- 虫号: 3859702
- 注册: 2015-05-09
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
9楼2017-01-06 21:30:59
太阳的电子
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1304.2
- 红花: 2
- 帖子: 175
- 在线: 45.6小时
- 虫号: 5210138
- 注册: 2016-11-07
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
10楼2017-01-06 22:10:33