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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问验证cds全长序列设计引物(cDNA模板)，后二十碱基几乎没有GC怎么办
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zhangdie

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by MAS_rice at 2017-01-06 21:25:08
试试ncbi primer blast吧
...

好的谢谢亲我去看看T T

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11楼2017-01-07 00:01:35
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zhangdie

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 太阳的电子 at 2017-01-06 22:10:33
你这是根据氨基酸序列找基因吗？

我是中间序列有5`，我做了3race拼上之后先用核苷酸比对，找到终止密码子后再翻译比对，都没什么问题，而且我race出的序列只隔十几个碱基就是终止密码子了。。现在就是引物问题，下游后二十个碱基全是AT。。前二十后二十那种设计引物法得不到目的基因是这个原因吗

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12楼2017-01-07 00:10:05
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太阳的电子

新虫 (小有名气)
提取完RNA后逆转录时用特异性引物ATATATAT…（你不是说下游是二十来个AT重复吗？）这样可以大大提高后面PCR扩增几率～

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13楼2017-01-07 06:38:30
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