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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zhangdie

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问验证cds全长序列设计引物(cDNA模板),后二十碱基几乎没有GC怎么办

为了设计这个引物我查了好多资料,pp5也下了学了但是验证cds的引物基本上只有前二十和后二十这种设计法,但我下游引物用了最后二十四个碱基CG含量才大概20%,退火温度五十都不到,跑出条带做了连接转化但结果都不是目的基因。有人说用utr区设计,但是我5‘utr只有十五个已知碱基,是需要先做个5race吗?或者前辈们有什么别的方法?求指点谢谢

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MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zhangdie at 2017-01-05 23:48:07
我那个是一个植物fes基因,NCBI上没有一样的但是有别的植物的我看了看都是调控hsp70的照理说是没问题的,但就是全长去克就出不来,有没有别的设计引物的方法啊
...

试试ncbi primer blast吧

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竹杖芒鞋轻胜马,谁怕,一蓑烟雨任平生;回首向来萧瑟处,归去,也无风雨也无晴
8楼2017-01-06 21:25:08
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MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-06 07:45:02
能扩出来应该可以用吧,要不然你把这个扩出来的前段连个T载,再测序看看是不是目的前段

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竹杖芒鞋轻胜马,谁怕,一蓑烟雨任平生;回首向来萧瑟处,归去,也无风雨也无晴
2楼2017-01-03 23:20:27
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zhangdie

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by MAS_rice at 2017-01-03 23:20:27
能扩出来应该可以用吧,要不然你把这个扩出来的前段连个T载,再测序看看是不是目的前段

做过了,挑了十个菌都出了结果位置和我目的条带位置差不多,但测序回来都比对不上T T

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3楼2017-01-04 15:41:08
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MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangdie at 2017-01-04 15:41:08
做过了,挑了十个菌都出了结果位置和我目的条带位置差不多,但测序回来都比对不上T T
...

怎么比对不上呢,你用T载的局部序列去比对看看呢

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竹杖芒鞋轻胜马,谁怕,一蓑烟雨任平生;回首向来萧瑟处,归去,也无风雨也无晴
4楼2017-01-04 22:12:15
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