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请问验证cds全长序列设计引物(cDNA模板)，后二十碱基几乎没有GC怎么办
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为了设计这个引物我查了好多资料，pp5也下了学了但是验证cds的引物基本上只有前二十和后二十这种设计法，但我下游引物用了最后二十四个碱基CG含量才大概20%，退火温度五十都不到，跑出条带做了连接转化但结果都不是目的基因。有人说用utr区设计，但是我5‘utr只有十五个已知碱基，是需要先做个5race吗？或者前辈们有什么别的方法？求指点谢谢 发自小木虫Android客户端 |
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4楼2017-01-04 22:12:15
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我比过一次也让师姐比过一次，两个都是什么菌的基因序列，所以我想是不是特异性引物太差根本没克出我要的基因，升高退火温度就几乎没有条带，降低退火还会在500bp左右出现一堆别的条带。。。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-01-04 23:09:10
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-06 07:45:02
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-06 07:45:02
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能扩出来应该可以用吧，要不然你把这个扩出来的前段连个T载，再测序看看是不是目的前段 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-01-03 23:20:27
3楼2017-01-04 15:41:08
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6楼2017-01-05 20:20:29
我那个是一个植物fes基因，NCBI上没有一样的但是有别的植物的我看了看都是调控hsp70的照理说是没问题的，但就是全长去克就出不来，有没有别的设计引物的方法啊 发自小木虫Android客户端 |
7楼2017-01-05 23:48:07
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8楼2017-01-06 21:25:08
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9楼2017-01-06 21:30:59
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