应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白从-20℃拿出来，有沉淀
51/1返回列表
查看: 3730  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

杨武哥

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白从-20℃拿出来，有沉淀 已有2人参与

纯化后蛋白保存在负20℃，拿出来解冻后有沉淀出现，离心后测蛋白含量，很低啊！怎么提高其溶解度减少析出？
蛋白新手，跪求

@gyesang 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-12-29 10:47:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咸花生

木虫 (正式写手)
DDT是防止二硫键氧化，上面要你加甘油的，你要考虑会不会影响你下一步实验。蛋白质的稳定性和结构有关，一般认为全程4℃或者冰上是稳妥的，冻冰箱可以，常规做法液氮加超低温冰箱

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2016-12-29 15:34:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

云烟渺渺

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
杨武哥: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-12-29 20:06:28
没有做冻融实验就把蛋白冻存了吗？
可以尝试加10%的甘油和1-2mM EDTA，蛋白最好还是保存在-80摄氏度，如果要反复拿出来用就分装几管，反复冻融对蛋白不利，看你的描述不是蛋白析出了，是蛋白沉淀了。
赞一下 回复此楼
2楼2016-12-29 12:02:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨武哥

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 云烟渺渺 at 2016-12-29 12:02:17
没有做冻融实验就把蛋白冻存了吗？
可以尝试加10%的甘油和1-2mM EDTA，蛋白最好还是保存在-80摄氏度，如果要反复拿出来用就分装几管，反复冻融对蛋白不利，看你的描述不是蛋白析出了，是蛋白沉淀了。

没有做，这个第一次做，不懂怎么保存就直接过镍柱后，全部保存到低温冰箱了。
我试试添加甘油和EDTA。添加甘油的作用我在网上看到，说是因为其粘度大可以防止结构的改变，那么edta呢？
还有人说加DTT，这是什么作用？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-12-29 14:59:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
杨武哥: 金币+2 2016-12-29 20:07:00
纯化后的蛋白不要直接冻到冰箱中  首先  既然你是镍柱纯化  那么是用咪唑洗脱的吧？不知道你的咪唑浓度  但纯化后的蛋白溶液最好利用超滤换液除掉咪唑  以防对蛋白造成影响
其次  换液后蛋白可以加入甘油或者蔗糖后冻存  但即便是加了保护剂  也不要反复冻融  可以分装成几管

DTT主要是对含有二硫键的蛋白来说  可以保护其中的二硫键的还原态
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2016-12-29 15:18:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +12 adaie 2026-03-19 12/600 2026-03-26 11:10 by 3Strings
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +6 哈哈157349 2026-03-21 6/300 2026-03-26 10:39 by 醉在风里
[考研] 274求调剂 +11 顾九笙要谦虚 2026-03-24 16/800 2026-03-26 09:55 by stone_128
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +4 稻妻小编 2026-03-26 4/200 2026-03-26 09:52 by allen-yin
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪！？！
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 11/550 2026-03-25 16:17 by 87639
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭