应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 尿素PAGE胶 尿素结晶问题
131/2返回列表12下一页
查看: 4503  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

回头再说

新虫 (初入文坛)

[求助] 尿素PAGE胶 尿素结晶问题

我最近在做尿素page胶，室内温度10度不到20度，15mL胶，6.3尿素（MP级别），ddH2O 2.75mL，30%丙烯酰胺 4mL，5 乘TBE 3mL，10%APS 90μl,
TEMED 2.3 μl。 配制的时候用先用超声把尿素溶解在ddH2O，放置了一会稍有一些尿素结晶，灌胶后放了2个小时都没有凝固（烧杯里剩下的还是纯液体），胶板和烧杯后来放在暖气片上过夜放置，早上来看烧杯子里剩下的部分胶里尿素都结晶了，成针状混在胶里面。胶板上肉眼看不到结晶，但是样品孔形状歪七扭八的，怎么配啊？还有怎么能快一点配胶？

尿素PAGE胶 尿素结晶问题
胶板今天早上的情况


尿素PAGE胶 尿素结晶问题-1
烧杯里剩余的胶，搅动以后的样子
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-12-28 10:44:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

科学小覃

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 回头再说 at 2016-12-29 20:59:21
我用的是gelred，第一次用浸泡的方式泡了10分钟出头，无条带；第二次直接配在胶里，可以看到胶的颜色从红色逐渐变为黄色。 无论尿素溶解的怎么样都基本上没有条带，最后一次做只有一个marker有一个点。电压300V，电 ...

温度太低可以把所以需要的东西都放培养箱里，包括配体系及跑电泳过程。

gelred我们实验室也用，1它不能加到凝胶了，因为会使丙烯酰胺凝胶也着色，2它染单链核酸的灵敏度要比双链低1倍，3它染PAGE胶要比琼脂糖胶慢，建议染色1h
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

回头再说
生物科学
10楼2016-12-30 08:45:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

农夫山泉1992

新虫 (初入文坛)
低温对APS有影响，可以试试适当增加APS的量，TEMED的量不变，不过不要太多

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2016-12-29 15:04:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

回头再说

新虫 (初入文坛)
自己顶！d=====(￣▽￣*)b一下
赞一下 回复此楼
2楼2016-12-28 10:50:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

回头再说

新虫 (初入文坛)
尿素6.3g
回复此楼
3楼2016-12-28 11:00:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)
温度太低了，可以放烘箱或培养箱里，37度。
赞一下 回复此楼
生物科学
4楼2016-12-29 08:38:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

回头再说

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 科学小覃 at 2016-12-29 08:38:47
温度太低了，可以放烘箱或培养箱里，37度。

你好，我昨天重新配加了过量的TEMED，胶很快凝固了，但是拔梳子时胶里面出现了几个孔，我觉得我用劲也不大，还有跑这种胶的maker跟琼脂糖凝胶使用的不一样吗？我跑了marker和样品，照相啥都没有，蓝色溴酚蓝一直跑到马上到胶底

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
5楼2016-12-29 09:46:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)
”板和烧杯后来放在暖气片上过夜放置“

暖气片上放一杯水过夜也蒸干了吧？
我没有暖气片，没经验。。。
赞一下 回复此楼
6楼2016-12-29 13:59:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 回头再说 at 2016-12-29 09:46:31
你好，我昨天重新配加了过量的TEMED，胶很快凝固了，但是拔梳子时胶里面出现了几个孔，我觉得我用劲也不大，还有跑这种胶的maker跟琼脂糖凝胶使用的不一样吗？我跑了marker和样品，照相啥都没有，蓝色溴酚蓝一直跑 ...

你用的什么染色方法？丙烯酰胺有荧光猝灭作用，因此EB或 SYBR Gold染色灵敏度要比琼脂糖低很多。可以增加染色时间，《分子克隆》上推荐的是30-45min。另外这两种染料都不能预加到凝胶里面。
跑变性核酸电泳时，maker和样品要经过95度变性和冰浴处理，以使完全变成单链，不然会出现条带模糊或变型。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

回头再说
生物科学
8楼2016-12-29 20:37:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

回头再说

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 科学小覃 at 2016-12-29 20:37:31
你用的什么染色方法？丙烯酰胺有荧光猝灭作用，因此EB或 SYBR Gold染色灵敏度要比琼脂糖低很多。可以增加染色时间，《分子克隆》上推荐的是30-45min。另外这两种染料都不能预加到凝胶里面。
跑变性核酸电泳时，ma ...

我用的是gelred，第一次用浸泡的方式泡了10分钟出头，无条带；第二次直接配在胶里，可以看到胶的颜色从红色逐渐变为黄色。 无论尿素溶解的怎么样都基本上没有条带，最后一次做只有一个marker有一个点。电压300V，电流20mA。感觉好费呀，gelred贵贵的。样品孔里有针状的阻挡物，照胶的时候没有目标条带反而有块状疑似是尿素的东西在胶里。室温较低，尿素结晶太快了。今天还有同学让我把尿素溶解后过滤，我怕我还来不及过滤完配胶它就又结晶了
赞一下 回复此楼
9楼2016-12-29 20:59:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 回头再说 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 评审有感 +14 popular289 2026-05-18 23/1150 2026-05-20 17:39 by lincyb
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +6 fummck 2026-05-20 6/300 2026-05-20 17:29 by 姜太公烤鱼
[基金申请] 今年审到国自然15份，谈谈感受 +19 国自然国社科中 2026-05-17 20/1000 2026-05-20 14:14 by 仲夏夜的星星
[基金申请] 国自然评分 +3 无名者登山 2026-05-20 4/200 2026-05-20 13:29 by vito刘
[考博] 如果工作了想读博，可以边工作边读全日制嘛？ 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[有机交流] 如何实现卤原子转化 +3 BT20230424 2026-05-15 8/400 2026-05-20 09:32 by xtlilibin
[基金申请] 河北省自然科学基金 +3 Peterchao 2026-05-18 3/150 2026-05-20 08:57 by 霸_霸
[文学芳草园] 献血感触 +6 呀呀好傻 2026-05-19 11/550 2026-05-19 22:26 by 而立得乐
[考博] 云南大学材料与能源学院解琳课题组钙钛矿博士招生 +3 光伏爱好者 2026-05-17 5/250 2026-05-19 19:13 by 光伏爱好者
[基金申请] 2026山东省优青 +3 luckinging 2026-05-14 4/200 2026-05-19 16:15 by 52wls
[考博] 26/27申博自荐-锂/钠电池方向 5+3 狗头军师. 2026-05-15 4/200 2026-05-19 09:10 by moonboat
[基金申请] 同样的基金本子，换个专家直接从C变A！ (金币-10) +3 国自然国社科中 2026-05-19 3/150 2026-05-19 08:50 by Equinoxhua
[基金申请] 别被青基扩招骗了！26年科研内卷才刚刚开始 +3 国自然国社科中 2026-05-14 4/200 2026-05-19 08:48 by archvillain
[考博] 2026博士还有哪些学校有名额 +7 小王求读研 2026-05-15 8/400 2026-05-19 08:27 by zhyzzh
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[基金申请] 国自然上会要求 +5 无名者登山 2026-05-18 9/450 2026-05-18 17:50 by BlakeReary
[文学芳草园] 半夜喝咖啡 +3 myrtle 2026-05-15 5/250 2026-05-18 01:03 by 小沈2018
[考博] 光量子物理方向 博士招生 1人（2026.09） +3 sandyworld 2026-05-15 4/200 2026-05-17 14:38 by sandyworld
[有机交流] 求助2，4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 6/300 2026-05-16 19:46 by Equinoxhua
[硕博家园] 申请博士 +3 呃?呃 2026-05-15 3/150 2026-05-16 11:01 by a4742549
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭