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回头再说

新虫 (初入文坛)

[求助] 尿素PAGE胶 尿素结晶问题

我最近在做尿素page胶,室内温度10度不到20度,15mL胶,6.3尿素(MP级别),ddH2O 2.75mL,30%丙烯酰胺 4mL,5 乘TBE 3mL,10%APS 90μl,
TEMED 2.3 μl。 配制的时候用先用超声把尿素溶解在ddH2O,放置了一会稍有一些尿素结晶,灌胶后放了2个小时都没有凝固(烧杯里剩下的还是纯液体),胶板和烧杯后来放在暖气片上过夜放置,早上来看烧杯子里剩下的部分胶里尿素都结晶了,成针状混在胶里面。胶板上肉眼看不到结晶,但是样品孔形状歪七扭八的,怎么配啊?还有怎么能快一点配胶?

尿素PAGE胶 尿素结晶问题
胶板今天早上的情况


尿素PAGE胶 尿素结晶问题-1
烧杯里剩余的胶,搅动以后的样子
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科学小覃

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 回头再说 at 2016-12-29 20:59:21
我用的是gelred,第一次用浸泡的方式泡了10分钟出头,无条带;第二次直接配在胶里,可以看到胶的颜色从红色逐渐变为黄色。 无论尿素溶解的怎么样都基本上没有条带,最后一次做只有一个marker有一个点。电压300V,电 ...

温度太低可以把所以需要的东西都放培养箱里,包括配体系及跑电泳过程。

gelred我们实验室也用,1它不能加到凝胶了,因为会使丙烯酰胺凝胶也着色,2它染单链核酸的灵敏度要比双链低1倍,3它染PAGE胶要比琼脂糖胶慢,建议染色1h

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生物科学
10楼2016-12-30 08:45:18
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回头再说

新虫 (初入文坛)

自己顶!d=====( ̄▽ ̄*)b一下
2楼2016-12-28 10:50:04
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科学小覃

木虫 (正式写手)

温度太低了,可以放烘箱或培养箱里,37度。
生物科学
4楼2016-12-29 08:38:47
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回头再说

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 科学小覃 at 2016-12-29 08:38:47
温度太低了,可以放烘箱或培养箱里,37度。

你好,我昨天重新配加了过量的TEMED,胶很快凝固了,但是拔梳子时胶里面出现了几个孔,我觉得我用劲也不大,还有跑这种胶的maker跟琼脂糖凝胶使用的不一样吗?我跑了marker和样品,照相啥都没有,蓝色溴酚蓝一直跑到马上到胶底

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2016-12-29 09:46:31
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