24小时热门版块排行榜    

查看: 6927  |  回复: 7

w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)

[求助] Qpcr检测mRNA水平Ct值较高35及以上以致复孔差异大无法统计,但是跑胶p出了目的条带 已有1人参与

Qpcr检测文献报道的某细胞里某基因mRNA水平,但是做出来Ct值较高35及以上以致复孔差异大无法统计,但是跑胶显示p出了目的条带只是条带较弱,怎么可以降低Ct值?cDNA未做稀释,且反转用的模板量已经2ug了,引物特异性也挺好的,是直接引用比较权威的杂志当中的引物。还有什么办法可以优化一下?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-03 07:46:51
一、提取的RNA条带怎么样,有没有降解?二、如果RNA质量没有问题,有特异性的条带。那么你可以先将cDNA进行预扩增,可以扩12个循环。然后用扩增的cDNA 作为模板进行上机实验。也能反映基因表达变化差异的趋势。
2楼2016-12-27 07:59:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-27 07:59:36
一、提取的RNA条带怎么样,有没有降解?二、如果RNA质量没有问题,有特异性的条带。那么你可以先将cDNA进行预扩增,可以扩12个循环。然后用扩增的cDNA 作为模板进行上机实验。也能反映基因表达变化差异的趋势。

预扩增是要特定的试剂盒做吗?

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-12-27 08:17:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

warkan

金虫 (正式写手)

4楼2016-12-27 08:28:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by w雨过天晴j at 2016-12-27 08:17:41
预扩增是要特定的试剂盒做吗?
...

不用,就是用你的定量引物扩增就行了,就按普通的扩增程序就可以了。退火温度要比定量的退火的温度低一些。
5楼2016-12-27 08:37:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by warkan at 2016-12-27 08:28:09
调整阈值

可是现在做96孔板经常出现这种异常扩增曲线,不知道是怎么回事,做384就没有这种现象,这样调整阈值的话就不行了。
Qpcr检测mRNA水平Ct值较高35及以上以致复孔差异大无法统计,但是跑胶p出了目的条带



发自小木虫IOS客户端
6楼2016-12-27 10:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大东红日

木虫 (正式写手)

同样的问题,我现在都不知道实验是否还应该如何进行,ct值大于30且复孔偏差大。
7楼2017-01-03 00:35:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

star013

新虫 (知名作家)


8楼2017-01-03 10:24:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 w雨过天晴j 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +10 Tide man 2026-08-11 10/500 2026-08-12 20:59 by 陈晨晨陈啊
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
请填处理意见