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LS伊斯特伍德

新虫 (初入文坛)

[交流] qPCR 的重复问题

大家在做实验的时候,关于重复的问题是怎么考虑的,提取RNA 三次,在机器里面做放一个,还是在机器里面放三个井,只提取一次RNA ,或者所有的都做三次呢?大家是怎么考虑的呢?生物学重复的大牛,请帮帮我

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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)


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提取三次,那个是生物学重复,甚至应该全程做三遍。提取一次检测三次那个叫技术重复

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核酸提取与Taqman诊断
2楼2016-12-26 10:56:01
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LS伊斯特伍德

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2016-12-26 10:56:01
提取三次,那个是生物学重复,甚至应该全程做三遍。提取一次检测三次那个叫技术重复

谢谢你

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3楼2016-12-26 13:55:52
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
qPCR就提取一次,检测三次就好了。一般相对定量还有两个内参,内参就能消除提取误差

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4楼2016-12-26 15:31:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
3次提取RNA,是生物学重复;加样的时候至少平行加3孔,如果有1孔的数值与其它2孔数值差异太大就说明该孔数值不可信。
5楼2016-12-27 09:00:14
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20126566

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by yujiaping1 at 2016-12-26 15:31:57
qPCR就提取一次,检测三次就好了。一般相对定量还有两个内参,内参就能消除提取误差

你好,我看很多人说做qPCR要有三次生物学重复,后三次技术重复呢?生物学重复是指一个处理做三个平行,,技术重复是指每个平行检测三次,
我是第一次做qPCR,做完后才发现,需要做生物学重复,我想知道qPCR只提取一次(也就是只有一组平行),误差棒是怎么做出来的,符合发文章的标准吗?
现在很纠结需不需要重做一次,但有比较耗时耗力,所以针对上面的疑惑,求赐教。
6楼2018-05-04 08:51:38
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