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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qPCR 的重复问题
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LS伊斯特伍德

新虫 (初入文坛)

[交流] qPCR 的重复问题

大家在做实验的时候，关于重复的问题是怎么考虑的，提取RNA 三次，在机器里面做放一个，还是在机器里面放三个井，只提取一次RNA ，或者所有的都做三次呢？大家是怎么考虑的呢？生物学重复的大牛，请帮帮我

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1楼 2016-12-26 10:45:08
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提取三次，那个是生物学重复，甚至应该全程做三遍。提取一次检测三次那个叫技术重复

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核酸提取与Taqman诊断
2楼2016-12-26 10:56:01
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LS伊斯特伍德

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2016-12-26 10:56:01
提取三次，那个是生物学重复，甚至应该全程做三遍。提取一次检测三次那个叫技术重复

谢谢你

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3楼2016-12-26 13:55:52
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
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qPCR就提取一次，检测三次就好了。一般相对定量还有两个内参，内参就能消除提取误差

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4楼2016-12-26 15:31:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
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3次提取RNA，是生物学重复；加样的时候至少平行加3孔，如果有1孔的数值与其它2孔数值差异太大就说明该孔数值不可信。
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5楼2016-12-27 09:00:14
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20126566

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by yujiaping1 at 2016-12-26 15:31:57
qPCR就提取一次，检测三次就好了。一般相对定量还有两个内参，内参就能消除提取误差

你好，我看很多人说做qPCR要有三次生物学重复，后三次技术重复呢？生物学重复是指一个处理做三个平行，，技术重复是指每个平行检测三次，
我是第一次做qPCR,做完后才发现，需要做生物学重复，我想知道qPCR只提取一次（也就是只有一组平行），误差棒是怎么做出来的，符合发文章的标准吗？
现在很纠结需不需要重做一次，但有比较耗时耗力，所以针对上面的疑惑，求赐教。
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6楼2018-05-04 08:51:38
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