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求助qPCR实验问题，请高人指教or讨论~谢谢已有3人参与
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本人实验欲比较2种细胞 4种处理（3实验组1对照组） 18个基因（含1个内参） 的相对变化，算上每个样品的三个重复，简而言之就是检测 2种细胞 12个样品的18个基因相对变化，实验室仪器是ABI 48孔的仪器，现在请教各位高手如何安排检测样品的摆放？ 如下方案： 1、每次检测所有样品的同一个基因（24个样品，准备第一次A基因16样品，第二次B基因16样品，第三次做A、B基因剩下的8样品） 2、每次检测一个样品的所有基因（18个基因还得分两次，先做16个，把9个样品的最后2个基因一起做） 以上方案并非每次反应都有内参，是否妥当？ 如果不妥，则如下方案： 3、每次检测都有内参，一次检测8个样品的同一个基因（做54次PCR！） 4、每次检测都有内参，一次检测1个样品的15个基因（剩下2个基因最后一起做） 实验室前辈建议用第1种方案，但是就是不知道这样做的误差能否容忍。 做了如下对比，同一样品，同样参数，测ACTB，上午下午跑的Ct值都不一样，有的差距大于2，当然，这里面误差可以是机器原因，也有可能是枪头、加样，人为等系统误差 不过，另一方面想，考虑这个问题的原因主要是机器误差，误差变化方向应该是一致的，做相对定量的话，这个问题貌似又可以忽略。 请各位高手不吝赐教，谢谢！ |
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