| 查看: 1218 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求助qPCR实验问题，请高人指教or讨论~谢谢 已有3人参与
|
||
|
本人实验欲比较2种细胞 4种处理（3实验组1对照组） 18个基因（含1个内参） 的相对变化，算上每个样品的三个重复，简而言之就是检测 2种细胞 12个样品的18个基因相对变化，实验室仪器是ABI 48孔的仪器，现在请教各位高手如何安排检测样品的摆放？ 如下方案： 1、每次检测所有样品的同一个基因（24个样品，准备第一次A基因16样品，第二次B基因16样品，第三次做A、B基因剩下的8样品） 2、每次检测一个样品的所有基因（18个基因还得分两次，先做16个，把9个样品的最后2个基因一起做） 以上方案并非每次反应都有内参，是否妥当？ 如果不妥，则如下方案： 3、每次检测都有内参，一次检测8个样品的同一个基因（做54次PCR！） 4、每次检测都有内参，一次检测1个样品的15个基因（剩下2个基因最后一起做） 实验室前辈建议用第1种方案，但是就是不知道这样做的误差能否容忍。 做了如下对比，同一样品，同样参数，测ACTB，上午下午跑的Ct值都不一样，有的差距大于2，当然，这里面误差可以是机器原因，也有可能是枪头、加样，人为等系统误差 不过，另一方面想，考虑这个问题的原因主要是机器误差，误差变化方向应该是一致的，做相对定量的话，这个问题貌似又可以忽略。 请各位高手不吝赐教，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有122人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因组PCR用于验证RT-PCR引物的实验思路，请大虾们把把关
已经有21人回复
- 求助aspen plus 电解质方面的问题，希望得到指导，谢谢！
已经有3人回复
- 编辑的意见是要做重复实验，在实验过程中取样三次不算是重复实验吗？怎样回复？
已经有9人回复
- 关于2^-△△CT结果的处理
已经有3人回复
- 一个关于qPCR标准曲线的问题。谢谢！
已经有12人回复
- 分子优化总是出错，请大家帮忙
已经有5人回复
- 求解：qPCR & RT-qPCR 的区别
已经有10人回复
4楼2015-05-27 09:26:36
lansong9783
金虫 (小有名气)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 1479.1
- 红花: 2
- 帖子: 127
- 在线: 53.9小时
- 虫号: 416691
- 注册: 2007-06-30
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
2楼2015-05-11 04:16:26
3楼2015-05-26 21:55:17
yxy71
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3479.6
- 散金: 50
- 帖子: 123
- 在线: 149.9小时
- 虫号: 1125804
- 注册: 2010-10-18
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
5楼2015-12-24 22:42:25
10