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1007251466

新虫 (初入文坛)

[求助] 3%琼脂糖凝胶电泳点样量 已有1人参与

如果我用3%的琼脂糖凝胶,500ng/ul的质粒酶切用10ul的体系,载体2700,目的片段1700,怎样点样才能让目的片段的条带能看清,又比较细

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爱看小虎牙

金虫 (正式写手)

2楼2016-12-23 10:14:42
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
根据你的需要,我认为你用1%的琼脂糖凝胶就足够了。可以选择用4500bp左右的marker,如果是10μL的体系,可以选择用中孔的胶,足以加入20μL样品的体积。10μL酶切产物加入2μL loading buffer 混匀,点上marker,直接点样,跑胶回收就可以了。如果用3%的琼脂糖,一是没有必要,二是跑胶跑的太慢。希望能够帮助你。
3楼2016-12-23 10:21:55
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C小杨

新虫 (初入文坛)

3%的胶浓度太大。可能会导致条带跟载体分不开哦,那年为了让200多bp的目的片段看的清晰,用3%的胶,结果载体大约12k的骨架跟Maker的2k带差不多位置。
4楼2016-12-23 17:23:25
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1007251466

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-23 10:21:55
根据你的需要,我认为你用1%的琼脂糖凝胶就足够了。可以选择用4500bp左右的marker,如果是10μL的体系,可以选择用中孔的胶,足以加入20μL样品的体积。10μL酶切产物加入2μL loading buffer 混匀,点上marker,直 ...

谢谢,不过我们实验室没有哪种marker

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5楼2016-12-23 23:21:25
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