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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 扩增10、20个循环各需要引物多少？
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z631535213

木虫 (正式写手)

[求助] 扩增10、20个循环各需要引物多少？ 已有3人参与

楼主需要在体系里加入两对引物，一对扩增前10（20）个循环，另外一对扩增剩下的循环次数（总共40个循环）。引物已稀释成10uM，想请教下扩增10（20个循环）需要多少的引物量

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1楼 2016-12-09 09:18:21
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

C小杨

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-07 21:22:21
不想算。建议第二对引物设计的更长，扩增后面的循环的时候，适当提高退火温度；或者分开两次扩增
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2楼2016-12-09 10:41:56
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
z631535213: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2017-01-07 16:31:28
你50UL体系加1UL.=0.2
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采菊东篱下，悠然见南山。
5楼2016-12-09 12:32:47
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
z631535213: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2017-01-07 16:31:44
按体系加，我们25的加0.5  引物浓度是10um

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
6楼2016-12-09 13:01:16
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普通回帖

z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by C小杨 at 2016-12-09 10:41:56
不想算。建议第二对引物设计的更长，扩增后面的循环的时候，适当提高退火温度；或者分开两次扩增

第一队我设计的理论tm是46，第二对理论tm是55+

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3楼2016-12-09 12:26:06
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by C小杨 at 2016-12-09 10:41:56
不想算。建议第二对引物设计的更长，扩增后面的循环的时候，适当提高退火温度；或者分开两次扩增

实验是一次把两对引物都加进去

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4楼2016-12-09 12:26:59
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晓来林醉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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z631535213: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2017-01-07 16:32:02
根据体系来，如果是25的话加入0.5??引物浓度是10微摩尔

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7楼2016-12-09 13:21:54
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shakespace

木虫 (著名写手)

上帝使者
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-07 21:22:42
为啥要两对引物同一体系喃？分开做不行吗？万一做不出来，您分析得出是哪一步的原因吗？要我就笨一点，分两次做。第一次把第二次的模板整出来再说，再整第二次

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天赋使命！
8楼2016-12-09 13:48:40
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迷路人啊

新虫 (小有名气)
第一次扩增结束直接稀释做模板进行第二次扩增
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9楼2016-12-10 12:04:53
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-09 13:01:16
按体系加，我们25的加0.5  引物浓度是10um

我也做过25ul体系的，40个循环加的0.5ul（10uM）

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10楼2016-12-12 10:43:40
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