24小时热门版块排行榜    

查看: 1924  |  回复: 12

z631535213

木虫 (正式写手)

[求助] 扩增10、20个循环各需要引物多少? 已有3人参与

楼主需要在体系里加入两对引物,一对扩增前10(20)个循环,另外一对扩增剩下的循环次数(总共40个循环)。引物已稀释成10uM,想请教下扩增10(20个循环)需要多少的引物量

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

C小杨

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-07 21:22:21
不想算。建议第二对引物设计的更长,扩增后面的循环的时候,适当提高退火温度;或者分开两次扩增
2楼2016-12-09 10:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
z631535213: 金币+5, 有帮助, 谢谢 2017-01-07 16:31:28
你50UL体系加1UL.=0.2
采菊东篱下,悠然见南山。
5楼2016-12-09 12:32:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
z631535213: 金币+5, 有帮助, 谢谢 2017-01-07 16:31:44
按体系加,我们25的加0.5  引物浓度是10um

发自小木虫Android客户端
知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
6楼2016-12-09 13:01:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by C小杨 at 2016-12-09 10:41:56
不想算。建议第二对引物设计的更长,扩增后面的循环的时候,适当提高退火温度;或者分开两次扩增

第一队我设计的理论tm是46,第二对理论tm是55+

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-12-09 12:26:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by C小杨 at 2016-12-09 10:41:56
不想算。建议第二对引物设计的更长,扩增后面的循环的时候,适当提高退火温度;或者分开两次扩增

实验是一次把两对引物都加进去

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-12-09 12:26:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晓来林醉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
z631535213: 金币+5, 有帮助, 谢谢 2017-01-07 16:32:02
根据体系来,如果是25的话加入0.5??引物浓度是10微摩尔

发自小木虫Android客户端
7楼2016-12-09 13:21:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shakespace

木虫 (著名写手)

上帝使者


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-07 21:22:42
为啥要两对引物同一体系喃?分开做不行吗?万一做不出来,您分析得出是哪一步的原因吗?要我就笨一点,分两次做。第一次把第二次的模板整出来再说,再整第二次

发自小木虫Android客户端
天赋使命!
8楼2016-12-09 13:48:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迷路人啊

新虫 (小有名气)

第一次扩增结束直接稀释做模板进行第二次扩增
9楼2016-12-10 12:04:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-09 13:01:16
按体系加,我们25的加0.5  引物浓度是10um

我也做过25ul体系的,40个循环加的0.5ul(10uM)

发自小木虫IOS客户端
10楼2016-12-12 10:43:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 z631535213 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:47 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:46 by vs90ilomwc
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 3rkserf6qr 2026-02-07 5/250 2026-02-08 08:32 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 3rkserf6qr 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:27 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +5 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:26 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +5 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:12 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:07 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 08:06 by vs90ilomwc
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 07:52 by vs90ilomwc
[找工作] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 07:46 by vs90ilomwc
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:32 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:27 by vs90ilomwc
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:26 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:07 by vs90ilomwc
[硕博家园] 博士延得我,科研能力直往上蹿 +8 偏振片 2026-02-02 8/400 2026-02-08 06:52 by liyeqik
[有机交流] 酰胺脱乙酰基 10+5 chibby 2026-02-03 12/600 2026-02-07 19:29 by 江东闲人
[基金申请] 同年申请2项不同项目,第1个项目里不写第2个项目的信息,可以吗 +4 hitsdu 2026-02-06 4/200 2026-02-07 13:07 by jurkat.1640
[考博] 天津大学招2026.09的博士生,欢迎大家推荐交流(博导是本人) +4 a793625982 2026-02-05 5/250 2026-02-07 10:57 by a793625982
[公派出国] CSC & MSCA 博洛尼亚大学能源材料课题组博士/博士后招生|MSCA经费充足、排名优 +4 雨念 2026-02-01 6/300 2026-02-06 23:32 by MelissaPon
[教师之家] 遇见不省心的家人很难过 +18 otani 2026-02-03 22/1100 2026-02-04 11:06 by tangmnt
信息提示
请填处理意见