| 查看: 1823 | 回复: 9 | ||
[求助]
细胞转染筛选问题 已有4人参与
|
我用一个质粒转染了细胞，质粒上的功能集团（包含rfp）可以整合细胞系基因组，转染之后能看到红色荧光，那么有什么办法能将有红色荧光的细胞筛选出来呢，有红色荧光的是不是有可能也是瞬时表达，那么怎样将转基因的细胞筛选出来呢？求大神支招，谢谢！  |
回复此楼» 猜你喜欢
大佬帮着分析今年的评审意见？该课题连续申请了三年了，明年要不要换个方向。
已经有11人回复
-
两块石头
已经有10人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有6人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有8人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 用于线虫的质粒能转染细胞吗？
已经有5人回复
- 细胞转染问题
已经有21人回复
- shRNA干扰与转染问题求助
已经有7人回复
- G418筛选转染问题
已经有2人回复
- Bac to bac 昆虫转染
已经有3人回复
- 细胞稳定转染时的一些问题
已经有0人回复
- pEGFP-C1载体上连接目的基因，瞬时转染后48小时可以用WB直接检测几个蛋白表达量吗
已经有3人回复
- 罗氏转染试剂转染
已经有0人回复
- CHO细胞中，G418加压筛选与DHFR系统加压筛选的区别？
已经有15人回复
- lipo2000转染质粒的相关问题
已经有3人回复
- 慢病毒转染牙周膜细胞
已经有3人回复
- puromycin筛选细胞的问题
已经有2人回复
- 细胞瞬时转染和质粒复制
已经有23人回复
- 质粒转染细胞的问题！！！
已经有3人回复
- 做过脂质体2000转染细胞的 特别是原代细胞的帮我指点一下，非常感谢
已经有1人回复
- 真核细胞转染，单克隆细胞GFP不表达？
已经有1人回复
- 【资料】生物实验必备（很全的）
已经有725人回复
- 有关共转染的问题
已经有2人回复
- 请大家看看这个eGFP真核载体，为什么转染Sp2/0后看不到荧光？
已经有5人回复
- 【求助/交流】脂质体稳定转染问题请教！
已经有3人回复
- 【求助/交流】动物细胞G418筛选
已经有2人回复
star013 
新虫 (知名作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1488.5
- 散金: 831
- 红花: 33
- 帖子: 5395
- 在线: 493.3小时
- 虫号: 1401381
- 注册: 2011-09-14
- 专业: 法学
2楼2016-11-29 18:02:11
3楼2016-11-30 09:40:56
4楼2016-11-30 09:41:46
imyting
至尊木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 66 (初中生)
- 金币: 10511.7
- 散金: 658
- 红花: 5
- 帖子: 807
- 在线: 168.7小时
- 虫号: 736362
- 注册: 2009-03-31
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2016-11-30 15:19:20
6楼2016-12-12 12:59:11
Tomas-Bin
金虫 (正式写手)
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 1026.5
- 散金: 436
- 红花: 24
- 帖子: 455
- 在线: 112.5小时
- 虫号: 2282038
- 注册: 2013-02-14
- 性别: GG
- 专业: 疫苗学
7楼2016-12-13 09:17:49
8楼2016-12-23 13:45:06
|
我这边看到一个筛选稳转株的文章，复制粘贴下，楼主看看能不能用，主要是具体的实验操作： 48h加入选择性抗生素进行稳转株筛选，预实验确定抗生素的杀伤浓度（在规定时间内，将细胞全部杀死的最低浓度）。 1. 提前一天接种细胞与24孔板中，待第二天长成25%单层为宜，二氧化碳培养箱中37℃过夜培养； 2.第二天将培养液换成含抗生素的培养基，抗生素浓度按梯度递增； 3.培养7-10天左右绝大多数细胞死亡抗生素浓度为准，筛选细胞时刻适当提高浓度； 4.二氧化碳培养箱中37℃培养72h后按照1:10的比例将转染细胞传代，使用预实验得到的抗生素浓度的培养基培养。后挑选单克隆，有限稀释法挑取单克隆。 5.Western blot或ELISA检测蛋白的表达情况，挑取多个单克隆进行表达检测，筛选出表达量最高的克隆传代并保存。最终进行稳转株筛选高表达的稳定细胞株，相对于瞬时转染稳定细胞系构建需大量的时间和成本，是满足活性蛋白大量制备的最好方法。 这个应该是个通用的实验步骤，楼主结合自己的情况看看能不能用吧。 |
9楼2018-04-19 10:53:35
10楼2018-04-19 11:01:16
100