24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1679  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

山农大的80后

新虫 (初入文坛)

[交流] 大基因片段的扩增和载体构建已有9人参与

各位同仁好,我最近想扩增一个3500bp基因片段,利用PFU跑PCR后进行胶回收,然后将胶回收产物作为模板又进行扩增,然后胶回收,利用普通Taq酶扩增后跑电泳,发现条带不是3000多bp了,连接了18-T后筛菌,条带也不够3000多。麻烦哪位老师给我指点指点,谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山农大的80后

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2016-11-25 06:34:48
前边两部胶回收片段大小是否正确?最后一步为什么换用Taq了?

谢谢您的回复,第一次用cDNA扩增时片段大小正确,不过再拿这次胶回收产物做模板扩增时,电泳片段大小似乎就有点不对了。Pfu扩增时平末端,没法连接18-T.
3楼2016-11-25 09:21:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
前边两部胶回收片段大小是否正确?最后一步为什么换用Taq了?
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2016-11-25 06:34:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
PCR程序设定的延伸时间加长点?我的目的片段连接T1老不长菌,好不容易长了电泳条带也不对

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-11-25 15:47:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

star013

新虫 (知名作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们可以帮您做该技术哈

发自小木虫Android客户端
5楼2016-11-25 17:36:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见