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元元元儿

新虫 (小有名气)

[交流] PCR相关问题

小伙伴们，帮忙看看前四种是什么情况，应该不是模版降解造成的，2.6和3.7和4.8用的同一个模版，谢谢啦

PCR相关问题


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1楼 2016-11-23 18:42:01
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zuiaixuexi

至尊木虫 (文坛精英)
★
元元元儿(金币+1): 谢谢参与
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-11-25 00:48:32
非此专业，不懂啊，祝你好运吧 ！
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2楼2016-11-23 18:48:15
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智明寻找春娇

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-25 00:48:39
引用回帖:
1楼: Originally posted by 元元元儿 at 2016-11-23 18:42:01
小伙伴们，帮忙看看前四种是什么情况，应该不是模版降解造成的，2.6和3.7和4.8用的同一个模版，谢谢啦

...

首先，要说清楚是用什么跑出来的，前四条带上很明显，在胶孔处有大量残余，说明是有大分子物质纯在，建议先测下浓度，去除蛋白质等大分子物质在进行跑胶

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13楼2016-11-25 00:38:29
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luokaikmt

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先要清楚你跑的是什么东西，再分析原因

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14楼2016-11-25 07:40:54
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元元元儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by luokaikmt at 2016-11-25 07:40:54
先要清楚你跑的是什么东西，再分析原因

pcr产物，您帮忙看看是什么原因

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15楼2016-11-25 11:05:34
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luokaikmt

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by 元元元儿 at 2016-11-25 11:05:34
pcr产物，您帮忙看看是什么原因
...

你的模板用的什么？

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16楼2016-11-25 18:43:07
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元元元儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 智明寻找春娇 at 2016-11-25 00:38:29
首先，要说清楚是用什么跑出来的，前四条带上很明显，在胶孔处有大量残余，说明是有大分子物质纯在，建议先测下浓度，去除蛋白质等大分子物质在进行跑胶
...

模版是线虫的DNA，跑的PCR产物

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17楼2016-11-25 18:44:19
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元元元儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by luokaikmt at 2016-11-25 18:43:07
你的模板用的什么？
...

线虫DNA

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18楼2016-11-25 18:45:06
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luokaikmt

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by 元元元儿 at 2016-11-25 18:44:19
模版是线虫的DNA，跑的PCR产物
...

是不是大片断？加入的多少体系加入了多少模板？

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19楼2016-11-25 22:17:47
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元元元儿

新虫 (小有名气)
20微升体系，加的4微升模版DNA

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20楼2016-11-25 22:34:50
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mailmrcai

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
非特异性扩增太多，建议加长引物同时提高退火温度

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21楼2016-11-25 22:59:57
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zncsnan

新虫 (初入文坛)
模板加多了
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22楼2016-11-27 16:30:37
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元元元儿

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引用回帖:
22楼: Originally posted by zncsnan at 2016-11-27 16:30:37
模板加多了

20微升体系，加的4微升模版

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23楼2016-11-27 20:20:07
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黄菠萝小姐

新虫 (初入文坛)
稀释模版

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24楼2016-11-29 14:08:56
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元元元儿

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引用回帖:
24楼: Originally posted by 黄菠萝小姐 at 2016-11-29 14:08:56
稀释模版

没有引物二聚体的是模版稀释10倍了，还是弥散，好难过
PCR相关问题-1



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25楼2016-11-29 19:03:31
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黄菠萝小姐

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25楼: Originally posted by 元元元儿 at 2016-11-29 19:03:31
没有引物二聚体的是模版稀释10倍了，还是弥散，好难过

...

你的marker都弥散，建议你，1.换个机器跑2.换电泳液 也有可能是电流电压不合适，我能想到的就只有这样，你可以跑跑别的，如果能跑出来，说明是你样品的问题，以我自己做的经验，就是电泳液太久了，模版浓度太高

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26楼2016-11-29 19:07:19
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元元元儿

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26楼: Originally posted by 黄菠萝小姐 at 2016-11-29 19:07:19
你的marker都弥散，建议你，1.换个机器跑2.换电泳液 也有可能是电流电压不合适，我能想到的就只有这样，你可以跑跑别的，如果能跑出来，说明是你样品的问题，以我自己做的经验，就是电泳液太久了，模版浓度太高
...

好的好的，电泳液都是新换的，其他人跑细菌都没有问题-_-#

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27楼2016-11-29 19:08:43
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黄菠萝小姐

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27楼: Originally posted by 元元元儿 at 2016-11-29 19:08:43
好的好的，电泳液都是新换的，其他人跑细菌都没有问题-_-#
...

再稀释不行，就重跑pcr，再不行重新设计引物。就只能这样

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28楼2016-11-29 19:12:50
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元元元儿

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28楼: Originally posted by 黄菠萝小姐 at 2016-11-29 19:12:50
再稀释不行，就重跑pcr，再不行重新设计引物。就只能这样
...

嗯嗯好的谢谢啦

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29楼2016-11-29 19:13:12
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syhorchid3楼
2016-11-23 18:50   回复  
元元元儿(金币+1): 谢谢参与
syhorchid4楼
2016-11-23 18:51   回复  
元元元儿(金币+1): 谢谢参与
syhorchid5楼
2016-11-23 18:51   回复  
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syhorchid6楼
2016-11-23 18:51   回复  
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syhorchid7楼
2016-11-23 18:52   回复  
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syhorchid8楼
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syhorchid9楼
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syhorchid10楼
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syhorchid12楼
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