| 查看: 7183 | 回复: 13 | ||
siyuansing银虫 (小有名气)
|
[求助]
无缝克隆后平板不长菌落 已有3人参与
|
|
|
无缝克隆使用全式金的无缝克隆试剂盒，诺维赞的无缝克隆试剂盒，NEB的T4聚合酶，都效果甚微。 用全式金的试剂盒做出来过2个克隆，后来就无论怎么做都做不出来。就是平板上不长菌落，检查过引物，肯定没有问题，PCR扩增也很好。目的片段和载体的比例都是在2:1到3:1之间。目的片段2000kb，载体4000kb。不知道提高总的DNA量会不会有效果，请大家给个建议。 |
回复此楼» 猜你喜欢
解密度鲁特韦——新一代HIV整合酶抑制剂的化学、药理与产业化图景
已经有0人回复
-
左炔诺孕酮从沃氏氧化物到炔基化反应的工艺迭代与靶点解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有201人回复
-
“关闭瘙痒信号”的多肽地非法林醋酸盐全解析
已经有1人回复
-
Tosylate-DPA-714介导¹⁸F-DPA-714 PET成像的前沿进展
已经有0人回复
-
I-BRD9: BRD9溴结构域化学探针，BET选择性>700倍
已经有0人回复
-
莫那利珠单抗阻断NKG2A/HLA-E抑制通路 | Biochempartner
已经有0人回复
-
GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner
已经有0人回复
-
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner
已经有0人回复
-
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner
已经有0人回复
-
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2016-11-20 16:35:19
siyuansing
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 296.3
- 散金: 10
- 帖子: 67
- 在线: 14.6小时
- 虫号: 2399997
- 注册: 2013-04-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
|
同源臂15bp，载体通过酶切线性化，都是胶回收。全式金的引物设计方案是把粘性末端算在同源臂上，有个同学说不能算粘性末端。两种方法都试过，做出来的那一次是前引物同源臂有粘性末端，后引物没有粘性末端。模板和目的基因的摩尔浓度比例基本都是1比2到1比3。今天把模板和目的基因都浓缩了，都是100多ng(刚从实验室回来，不记得具体的数据了)，模板加了2微，目的基因加了3微。不知道明天结婚怎么样。不知道兄台有什么经验可以传授的？非常感谢！ 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2016-11-20 22:14:33
5楼2016-11-21 20:52:54
siyuansing6楼2016-11-22 08:13:49
4楼2016-11-21 13:29:41
siyuansing
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 296.3
- 散金: 10
- 帖子: 67
- 在线: 14.6小时
- 虫号: 2399997
- 注册: 2013-04-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
7楼2016-11-24 08:22:17
siyuansing
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 296.3
- 散金: 10
- 帖子: 67
- 在线: 14.6小时
- 虫号: 2399997
- 注册: 2013-04-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
8楼2016-11-24 08:22:43
9楼2016-12-09 09:47:20
siyuansing
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 296.3
- 散金: 10
- 帖子: 67
- 在线: 14.6小时
- 虫号: 2399997
- 注册: 2013-04-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
10楼2016-12-09 17:25:27