应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助：测序正确的菌液，质粒抽提后，电泳的条带浅
171/2返回列表12下一页
查看: 3693  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

upwardkl

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助：测序正确的菌液，质粒抽提后，电泳的条带浅 已有3人参与

求助：取已加甘油保存的菌液（已测序），20ul，补加800ul的LB.半天后，扩大培养至20ml,后测菌液的浓度约为1.0，进行质粒抽提，电泳点样5ul,其条带显示如下，


在菌液的培养及抽提、检测的过程中可以做哪些调整？

求助：测序正确的菌液，质粒抽提后，电泳的条带浅
2016.11.11质粒检测.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
雪霁花开，向上追求
1楼 2016-11-12 10:31:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-14 07:42:11
你测浓度了吗？会不会是菌液浓度太低，提出来的质粒浓度低，所以没有跑出来的很浅或没有跑出来呀
赞一下(1人) 回复此楼
···
2楼2016-11-12 11:33:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xucb970

金虫 (小有名气)
提取操作不够细致，再提几次

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
宁坐板凳十年冷，不写文章半句空。
4楼2016-11-12 15:04:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-14 07:41:51
你这是低拷贝质粒还是高拷贝质粒，我也觉得你是菌液浓度低，我们提质粒一般千分之一接菌过夜摇，然后再提质粒，最后洗脱时可以试着减少洗脱液的量
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2016-11-12 15:08:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljylhy

新虫 (初入文坛)
看看是不是药品沉淀了，尝试重新溶解提取药品

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2016-11-12 19:37:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lemonvivi

新虫 (小有名气)
有可能是你加P1没有充分混匀

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2016-11-13 08:52:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cry_2013

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by upwardkl at 2016-11-12 15:18:29
我的质粒是用T载体连接的目的基因的，应该是高拷贝的，洗脱液用的是说明书的最少量50ul,...

那你可以试着提高菌液浓度或增加摇菌量。。。
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2016-11-14 11:31:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a13515517892

木虫 (小有名气)
我知道的，用菌直接摇一般要培养8-12小时再看培养的情况来抽质粒的

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2016-11-14 18:37:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李保磊

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

①菌液的浓度的不够，可能同样的过夜时间，得到的菌液浓度不同

举报


①菌液的浓度的不够，可能同样的过夜时间，得到的菌液浓度不同

②因菌种的不同，质粒的拷贝数不同，有些是一些低拷贝，浓度较低
③不能完全按照试剂盒的步骤来，对于不同的菌株，你可能和生产厂家的菌株不一定相同，因此有不同的提取过程中有量的差异，需要摸索
④操作过程中，个人的因素也很大，技术不是很娴熟，造成一部分质粒流失

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
做最棒的自己！！
16楼2016-11-15 20:06:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

upwardkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 11:33:46
你测浓度了吗？会不会是菌液浓度太低，提出来的质粒浓度低，所以没有跑出来的很浅或没有跑出来呀

测了菌液浓度 大约在1.0呀
赞一下 回复此楼
雪霁花开，向上追求
3楼2016-11-12 14:43:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

upwardkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cry_2013 at 2016-11-12 15:08:09
你这是低拷贝质粒还是高拷贝质粒，我也觉得你是菌液浓度低，我们提质粒一般千分之一接菌过夜摇，然后再提质粒，最后洗脱时可以试着减少洗脱液的量

我的质粒是用T载体连接的目的基因的，应该是高拷贝的，洗脱液用的是说明书的最少量50ul,
赞一下 回复此楼
雪霁花开，向上追求
6楼2016-11-12 15:18:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by upwardkl at 2016-11-12 14:43:39
测了菌液浓度 大约在1.0呀...

你离了大概多少菌液啊~会不会是收集的太少了，所以回收的比较少了
赞一下 回复此楼
···
8楼2016-11-12 20:41:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

upwardkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 20:41:37
你离了大概多少菌液啊~会不会是收集的太少了，所以回收的比较少了...

5ml
10楼2016-11-13 12:43:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 upwardkl 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +3 wangyl_123 2026-10-10 6/300 2026-10-11 15:04 by Abin0406
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 5/250 2026-10-11 09:00 by 好运来～9527
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭