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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助：测序正确的菌液，质粒抽提后，电泳的条带浅
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upwardkl

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助：测序正确的菌液，质粒抽提后，电泳的条带浅 已有3人参与

求助：取已加甘油保存的菌液（已测序），20ul，补加800ul的LB.半天后，扩大培养至20ml,后测菌液的浓度约为1.0，进行质粒抽提，电泳点样5ul,其条带显示如下，


在菌液的培养及抽提、检测的过程中可以做哪些调整？

求助：测序正确的菌液，质粒抽提后，电泳的条带浅
2016.11.11质粒检测.JPG
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雪霁花开，向上追求
1楼 2016-11-12 10:31:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-14 07:42:11
你测浓度了吗？会不会是菌液浓度太低，提出来的质粒浓度低，所以没有跑出来的很浅或没有跑出来呀
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···
2楼2016-11-12 11:33:46
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xucb970

金虫 (小有名气)
提取操作不够细致，再提几次

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宁坐板凳十年冷，不写文章半句空。
4楼2016-11-12 15:04:53
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cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-14 07:41:51
你这是低拷贝质粒还是高拷贝质粒，我也觉得你是菌液浓度低，我们提质粒一般千分之一接菌过夜摇，然后再提质粒，最后洗脱时可以试着减少洗脱液的量
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5楼2016-11-12 15:08:09
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ljylhy

新虫 (初入文坛)
看看是不是药品沉淀了，尝试重新溶解提取药品

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7楼2016-11-12 19:37:50
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lemonvivi

新虫 (小有名气)
有可能是你加P1没有充分混匀

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9楼2016-11-13 08:52:04
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cry_2013

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by upwardkl at 2016-11-12 15:18:29
我的质粒是用T载体连接的目的基因的，应该是高拷贝的，洗脱液用的是说明书的最少量50ul,...

那你可以试着提高菌液浓度或增加摇菌量。。。
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14楼2016-11-14 11:31:32
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a13515517892

木虫 (小有名气)
我知道的，用菌直接摇一般要培养8-12小时再看培养的情况来抽质粒的

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15楼2016-11-14 18:37:14
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李保磊

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

①菌液的浓度的不够，可能同样的过夜时间，得到的菌液浓度不同

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①菌液的浓度的不够，可能同样的过夜时间，得到的菌液浓度不同

②因菌种的不同，质粒的拷贝数不同，有些是一些低拷贝，浓度较低
③不能完全按照试剂盒的步骤来，对于不同的菌株，你可能和生产厂家的菌株不一定相同，因此有不同的提取过程中有量的差异，需要摸索
④操作过程中，个人的因素也很大，技术不是很娴熟，造成一部分质粒流失

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做最棒的自己！！
16楼2016-11-15 20:06:56
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普通回帖

upwardkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 11:33:46
你测浓度了吗？会不会是菌液浓度太低，提出来的质粒浓度低，所以没有跑出来的很浅或没有跑出来呀

测了菌液浓度 大约在1.0呀
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雪霁花开，向上追求
3楼2016-11-12 14:43:39
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upwardkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cry_2013 at 2016-11-12 15:08:09
你这是低拷贝质粒还是高拷贝质粒，我也觉得你是菌液浓度低，我们提质粒一般千分之一接菌过夜摇，然后再提质粒，最后洗脱时可以试着减少洗脱液的量

我的质粒是用T载体连接的目的基因的，应该是高拷贝的，洗脱液用的是说明书的最少量50ul,
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雪霁花开，向上追求
6楼2016-11-12 15:18:29
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by upwardkl at 2016-11-12 14:43:39
测了菌液浓度 大约在1.0呀...

你离了大概多少菌液啊~会不会是收集的太少了，所以回收的比较少了
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···
8楼2016-11-12 20:41:37
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upwardkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 20:41:37
你离了大概多少菌液啊~会不会是收集的太少了，所以回收的比较少了...

5ml
10楼2016-11-13 12:43:23
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