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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助：测序正确的菌液，质粒抽提后，电泳的条带浅
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by upwardkl at 2016-11-13 12:43:23
5ml...

我们一般od3-4左右，收集5哦了ml

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···
11楼2016-11-13 12:45:50
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)
如果是 高拷贝数的质粒，接种后扩大培养十小时，理论上很多细菌了。没提出来就是你的操作过程或者kit是不是过期了。还有，你提出来以后不测浓度的吗？电泳可以不跑，至少 浓度还是要测吧

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12楼2016-11-13 23:35:05
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江边鸟

银虫 (小有名气)
把你的甘油菌送去测序公司测序，引物弄个非插入片段的pcr引物，这样测序肯定无信号，你不用出钱。然后让测序公司返还质粒和菌液就ok了………这方法很缺德很缺德慎用

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13楼2016-11-14 01:07:07
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cry_2013

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by upwardkl at 2016-11-12 15:18:29
我的质粒是用T载体连接的目的基因的，应该是高拷贝的，洗脱液用的是说明书的最少量50ul,...

那你可以试着提高菌液浓度或增加摇菌量。。。
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14楼2016-11-14 11:31:32
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a13515517892

木虫 (小有名气)
我知道的，用菌直接摇一般要培养8-12小时再看培养的情况来抽质粒的

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15楼2016-11-14 18:37:14
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李保磊

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

①菌液的浓度的不够，可能同样的过夜时间，得到的菌液浓度不同

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①菌液的浓度的不够，可能同样的过夜时间，得到的菌液浓度不同

②因菌种的不同，质粒的拷贝数不同，有些是一些低拷贝，浓度较低
③不能完全按照试剂盒的步骤来，对于不同的菌株，你可能和生产厂家的菌株不一定相同，因此有不同的提取过程中有量的差异，需要摸索
④操作过程中，个人的因素也很大，技术不是很娴熟，造成一部分质粒流失

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做最棒的自己！！
16楼2016-11-15 20:06:56
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upwardkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by choujiaoqi at 2016-11-13 23:35:05
如果是 高拷贝数的质粒，接种后扩大培养十小时，理论上很多细菌了。没提出来就是你的操作过程或者kit是不是过期了。还有，你提出来以后不测浓度的吗？电泳可以不跑，至少 浓度还是要测吧
...

抽提前菌液的弄度为1.0（OD600）左右，
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雪霁花开，向上追求
17楼2016-11-16 19:10:20
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