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猫不柔_

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体转化单菌落不明显,菌液pcr没有目标条带 已有3人参与

各位大神,本人分子遗传小萌新。最近在做实验胶回收后,uv下很明显2200左右的目标条带。但是连接转化后,单菌落很不明显,而且做菌液pcr只有500bp左右很亮的条带。这是怎么回事?是连接问题还是转化问题?如果做对照怎么做?

ps:连接topo载体,t载体都做过,转化dh 5alpha 感受态

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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787588366

金虫 (著名写手)

Steven

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是连接没有连上,你延长一下连接时间试试或者换一个连接酶。
奔跑吧,迎接每一个挑战!
2楼2016-10-13 13:50:54
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没连上,小菌落有可能是培养时间长长出来的杂菌,重新连吧

发自小木虫Android客户端
···
3楼2016-10-13 16:58:10
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该没有连接上,你可以酶切看看是不是可以切下来,或者提质粒,跑PCR试试,再或者测序验证
生活活生生累死
4楼2016-10-13 21:33:18
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lemonvivi

新虫 (小有名气)

用的什么抗性
5楼2016-10-14 09:04:21
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