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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体转化单菌落不明显，菌液pcr没有目标条带
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猫不柔_

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体转化单菌落不明显，菌液pcr没有目标条带 已有3人参与

各位大神，本人分子遗传小萌新。最近在做实验胶回收后，uv下很明显2200左右的目标条带。但是连接转化后，单菌落很不明显，而且做菌液pcr只有500bp左右很亮的条带。这是怎么回事？是连接问题还是转化问题？如果做对照怎么做？

ps：连接topo载体，t载体都做过，转化dh 5alpha 感受态

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-10-13 10:54:18
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787588366

金虫 (著名写手)

Steven

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是连接没有连上，你延长一下连接时间试试或者换一个连接酶。
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奔跑吧，迎接每一个挑战!
2楼2016-10-13 13:50:54
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没连上，小菌落有可能是培养时间长长出来的杂菌，重新连吧

发自小木虫Android客户端
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···
3楼2016-10-13 16:58:10
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该没有连接上，你可以酶切看看是不是可以切下来，或者提质粒，跑PCR试试，再或者测序验证
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生活活生生累死
4楼2016-10-13 21:33:18
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lemonvivi

新虫 (小有名气)
用的什么抗性
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5楼2016-10-14 09:04:21
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