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徐云帆

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌转化实验 已有3人参与

各位大神帮忙   大肠杆菌感受态细胞制备中 DMSO的具体作用是啥?  以及大肠杆菌转化实验中 不加DNA样品的负对照和加已知浓度DNA正对照的作用?

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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、DMSO  楼上已说的很清楚
2、通常不加质粒DNA转化的菌株在有抗性的平板上是不长的, 如果长了说明感受态污染了,或者抗生素有问题    这是阴性对照的作用/
3、加已知浓度DNA转化的菌株主要是看感受态的转化效率怎么样,如果长的菌落阳性菌落多,说明转化效率高,同时还可以说明你整个实验操作是正确的
个人见解:如果你做的很熟练了,这个阳性对照和阴性对照一般是不做的,这两个对照一般在自己刚做完感受态时,检测一下感受态效果怎么样,做一次就可以了,如果可以,后面转化的时候直接拿来用就行,不过以我个人的经验,阳性对照转进去的是已环化的质粒DNA,而平时我们转化的是连接产物,转化效率根本不一样,如果你的感受态可以转连接了2000bp以上片段的连接产物,那你的感受态应该效果还是不错的
7楼2016-10-08 16:34:20
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徐云帆

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 花花贝 at 2016-10-07 11:29:27
DMSO是冷冻保护剂吧!两个分别为阴性对照和阳性对照?

阳性对照的作用是啥啊?

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4楼2016-10-07 15:48:08
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mould

金虫 (小有名气)

钻石

DMSO是冷冻保护剂,同时也是一种渗透性保护剂,能够降低细胞冰点,减少冰晶的形成,减轻自由基对细胞损害,改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。

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人生没有如果,却有很多但是!
5楼2016-10-07 19:53:35
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普通回帖

花花贝

金虫 (知名作家)

DMSO是冷冻保护剂吧!两个分别为阴性对照和阳性对照?

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2楼2016-10-07 11:29:27
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3楼2016-10-07 13:53:41
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
DMSO是冷冻保护和渗透性保护剂,能够降低细胞冰点,减少冰晶的形成,减轻自由基对细胞损害,改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。

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6楼2016-10-07 22:54:18
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药娘子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wanglei512 at 2016-10-08 16:34:20
1、DMSO  楼上已说的很清楚
2、通常不加质粒DNA转化的菌株在有抗性的平板上是不长的, 如果长了说明感受态污染了,或者抗生素有问题    这是阴性对照的作用/
3、加已知浓度DNA转化的菌株主要是看感受态的转化效率 ...

你好,能请教你一个问题吗?用BL21感受态细胞转化平板不长菌会是什么原因呢?(空白对照不长菌)谢谢

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8楼2017-03-05 08:57:11
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小冀-

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 药娘子 at 2017-03-05 08:57:11
你好,能请教你一个问题吗?用BL21感受态细胞转化平板不长菌会是什么原因呢?(空白对照不长菌)谢谢
...

BL21菌株的转化效率本来就低,你可以适当提高感受态浓度,电转
···
9楼2017-03-05 15:00:24
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药娘子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 小冀- at 2017-03-05 15:00:24
BL21菌株的转化效率本来就低,你可以适当提高感受态浓度,电转...

嗯嗯 谢谢你的回复。那如果只长一个菌可以继续往下做吗?

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10楼2017-03-05 15:35:04
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