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蛋白纯化后全都消失没有了，求大神指导？
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| 做原核蛋白诱导，用的PET32a载体，诱导后，用 His融合标签蛋白纯化试剂盒【HIS*BIND PURIFICATION KIT His】进行纯化，结果纯化后所有蛋白带全都没有了，求大神指导？ |
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2楼2016-09-05 15:57:04
3楼2016-09-05 16:22:51
wlt728
铁杆木虫 (著名写手)
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-06 22:47:57
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-06 22:47:57
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标签没暴露出来，蛋白没挂到柱子上， 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-09-06 11:35:35
沉默、颜泪
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:31:42
肉肉-rourou: 金币+1 2016-11-03 14:02:47
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肉肉-rourou: 金币+1 2016-11-03 14:02:47
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试着用分子筛纯化吧。最好做WB检测一下是否有你的目的蛋白。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-09-06 12:21:25
mataomatao
禁虫 (正式写手)
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本帖内容被屏蔽 |
6楼2016-09-06 18:54:32
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肉肉-rourou: 金币+3 2016-11-03 14:02:32
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肉肉-rourou: 金币+3 2016-11-03 14:02:32
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每次洗脱得收集液点样看看 蛋白在哪一步不见得 才能指定对策 可能wash buffer里面咪唑浓度高了 或者拍? 发自小木虫IOS客户端 |
7楼2016-09-07 00:16:01
8楼2016-09-07 00:16:35
9楼2016-09-07 11:21:53
antelopeyy
金虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:32:33
肉肉-rourou: 金币+3 2016-11-03 14:02:03
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:32:33
肉肉-rourou: 金币+3 2016-11-03 14:02:03
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你可以一步一步排查情况，确定目的蛋白的去向： 1.首先SDS-PAGE确定目的蛋白是否在上清液，如果在上清液中，则进入第二步； 2.进行蛋白纯化，对纯化的流穿液和最后收集的纯化浓缩液和离心得到的滤出液都进行SDS-PAGE电泳； 若第一步中上清中没有目的蛋白，则目的蛋白没有可溶表达，需考虑表达问题；若流穿液中有目的蛋白，则表示没有挂柱，需则需要改变挂柱条件；若在滤出液中有目的蛋白，则可能超滤管本身有问题，需更换； |
10楼2016-09-18 22:00:30