应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化后全都消失没有了，求大神指导？
101/1返回列表
查看: 1581  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白纯化后全都消失没有了，求大神指导？

做原核蛋白诱导，用的PET32a载体，诱导后，用 His融合标签蛋白纯化试剂盒【HIS*BIND PURIFICATION KIT His】进行纯化，结果纯化后所有蛋白带全都没有了，求大神指导？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2016-09-05 15:24:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名
本帖仅楼主可见
2楼2016-09-05 15:57:04
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

何琼杰

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-06 22:47:40
我们最近也遇到了这个情况

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-09-05 16:22:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-06 22:47:57
标签没暴露出来，蛋白没挂到柱子上，

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
I am not a hero , but I served with heroes！
4楼2016-09-06 11:35:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沉默、颜泪

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:31:42
肉肉-rourou: 金币+1 2016-11-03 14:02:47
试着用分子筛纯化吧。最好做WB检测一下是否有你的目的蛋白。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-09-06 12:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mataomatao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2016-09-06 18:54:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr童先森

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:32:01
肉肉-rourou: 金币+3 2016-11-03 14:02:32
每次洗脱得收集液点样看看 蛋白在哪一步不见得 才能指定对策 可能wash buffer里面咪唑浓度高了 或者拍?

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
进步
7楼2016-09-07 00:16:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr童先森

新虫 (正式写手)
或者ph低了 或者没有结合上 或者没有表达 或者his没有暴露

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
进步
8楼2016-09-07 00:16:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shine372

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:32:15
肉肉-rourou: 金币+3 2016-11-03 14:02:16

首先你需要将菌体破碎后上清沉淀分别跑胶，确认蛋白是否可溶性表达；
其次纯化过程中取样，粗略计算样品中蛋白含量，再进行SDS-PAGE；
SDS-PAGE检测蛋白是有底限的，过少肯定没有条带
如果你的蛋白胶一片空白，连杂蛋白条带都没有，检查下你的SDS-PAGE是否操作正常
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2016-09-07 11:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

antelopeyy

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:32:33
肉肉-rourou: 金币+3 2016-11-03 14:02:03
你可以一步一步排查情况，确定目的蛋白的去向：
1.首先SDS-PAGE确定目的蛋白是否在上清液，如果在上清液中，则进入第二步；
2.进行蛋白纯化，对纯化的流穿液和最后收集的纯化浓缩液和离心得到的滤出液都进行SDS-PAGE电泳；
若第一步中上清中没有目的蛋白，则目的蛋白没有可溶表达，需考虑表达问题；若流穿液中有目的蛋白，则表示没有挂柱，需则需要改变挂柱条件；若在滤出液中有目的蛋白，则可能超滤管本身有问题，需更换；
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2016-09-18 22:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 肉肉-rourou 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂推荐 +3 清酒714 2026-03-26 3/150 2026-03-26 15:47 by 无际的草原
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[考研] 271求调剂 +5 生如夏花… 2026-03-22 5/250 2026-03-26 15:38 by zzll406
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +6 稻妻小编 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:12 by 852137818
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +5 晨昏线与星海 2026-03-20 5/250 2026-03-26 13:47 by 一直走不要停
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 11/550 2026-03-25 16:17 by 87639
[考研] 材料学硕333求调剂 +4 北道巷 2026-03-24 4/200 2026-03-25 14:16 by mapenggao
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 食品专硕 一志愿双一流 328 +3 xiaom99 2026-03-21 4/200 2026-03-24 21:20 by lailaisimei
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭