24小时热门版块排行榜    

查看: 1564  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白纯化后全都消失没有了,求大神指导?

做原核蛋白诱导,用的PET32a载体,诱导后,用 His融合标签蛋白纯化试剂盒【HIS*BIND PURIFICATION KIT His】进行纯化,结果纯化后所有蛋白带全都没有了,求大神指导?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shine372

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:32:15
肉肉-rourou: 金币+3 2016-11-03 14:02:16

首先你需要将菌体破碎后上清沉淀分别跑胶,确认蛋白是否可溶性表达;
其次纯化过程中取样,粗略计算样品中蛋白含量,再进行SDS-PAGE;
SDS-PAGE检测蛋白是有底限的,过少肯定没有条带
如果你的蛋白胶一片空白,连杂蛋白条带都没有,检查下你的SDS-PAGE是否操作正常
9楼2016-09-07 11:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

何琼杰

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-06 22:47:40
我们最近也遇到了这个情况

发自小木虫Android客户端
3楼2016-09-05 16:22:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-06 22:47:57
标签没暴露出来,蛋白没挂到柱子上,

发自小木虫Android客户端
I am not a hero , but I served with heroes!
4楼2016-09-06 11:35:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沉默、颜泪

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:31:42
肉肉-rourou: 金币+1 2016-11-03 14:02:47
试着用分子筛纯化吧。最好做WB检测一下是否有你的目的蛋白。

发自小木虫Android客户端
5楼2016-09-06 12:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见