应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化后全都消失没有了，求大神指导？
101/1返回列表
查看: 1570  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白纯化后全都消失没有了，求大神指导？

做原核蛋白诱导，用的PET32a载体，诱导后，用 His融合标签蛋白纯化试剂盒【HIS*BIND PURIFICATION KIT His】进行纯化，结果纯化后所有蛋白带全都没有了，求大神指导？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2016-09-05 15:24:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hydzp
a
2楼2016-09-05 15:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

何琼杰

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-06 22:47:40
我们最近也遇到了这个情况

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-09-05 16:22:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-06 22:47:57
标签没暴露出来，蛋白没挂到柱子上，

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
I am not a hero , but I served with heroes！
4楼2016-09-06 11:35:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沉默、颜泪

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:31:42
肉肉-rourou: 金币+1 2016-11-03 14:02:47
试着用分子筛纯化吧。最好做WB检测一下是否有你的目的蛋白。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-09-06 12:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mataomatao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2016-09-06 18:54:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr童先森

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:32:01
肉肉-rourou: 金币+3 2016-11-03 14:02:32
每次洗脱得收集液点样看看 蛋白在哪一步不见得 才能指定对策 可能wash buffer里面咪唑浓度高了 或者拍?

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
进步
7楼2016-09-07 00:16:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr童先森

新虫 (正式写手)
或者ph低了 或者没有结合上 或者没有表达 或者his没有暴露

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
进步
8楼2016-09-07 00:16:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shine372

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:32:15
肉肉-rourou: 金币+3 2016-11-03 14:02:16

首先你需要将菌体破碎后上清沉淀分别跑胶，确认蛋白是否可溶性表达；
其次纯化过程中取样，粗略计算样品中蛋白含量，再进行SDS-PAGE；
SDS-PAGE检测蛋白是有底限的，过少肯定没有条带
如果你的蛋白胶一片空白，连杂蛋白条带都没有，检查下你的SDS-PAGE是否操作正常
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2016-09-07 11:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

antelopeyy

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:32:33
肉肉-rourou: 金币+3 2016-11-03 14:02:03
你可以一步一步排查情况，确定目的蛋白的去向：
1.首先SDS-PAGE确定目的蛋白是否在上清液，如果在上清液中，则进入第二步；
2.进行蛋白纯化，对纯化的流穿液和最后收集的纯化浓缩液和离心得到的滤出液都进行SDS-PAGE电泳；
若第一步中上清中没有目的蛋白，则目的蛋白没有可溶表达，需考虑表达问题；若流穿液中有目的蛋白，则表示没有挂柱，需则需要改变挂柱条件；若在滤出液中有目的蛋白，则可能超滤管本身有问题，需更换；
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2016-09-18 22:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 肉肉-rourou 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学调剂 +7 提神豆沙包 2026-02-28 9/450 2026-03-01 11:50 by 王伟要上岸啊
[考研] 0856材料专业298分有科研经历 硕士研究生调剂自荐信 +5 zyf上岸 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:50 by ms629
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 材料类求调剂 +8 wana_kiko 2026-02-28 8/400 2026-03-01 11:44 by 王伟要上岸啊
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二 +7 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 7/350 2026-03-01 11:44 by 月下best
[考研] 302材料工程求调剂 +3 Doleres 2026-03-01 4/200 2026-03-01 11:38 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 高分子化学与物理调剂 +5 好好好1233 2026-02-28 9/450 2026-03-01 10:59 by fengyu211
[考研] 291分工科求调剂 +7 science饿饿 2026-03-01 8/400 2026-03-01 10:43 by sunny81
[考研] 0856化工专硕求调剂 +5 董boxing 2026-03-01 5/250 2026-03-01 10:41 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 272求调剂 +4 材紫有化 2026-02-28 4/200 2026-03-01 09:20 by L135790
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭