24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 32.5
散金: 13
帖子: 14
在线: 9.6小时
虫号: 3546614
注册: 2014-11-19
专业: 作物分子育种

[交流] 蛋白纯化后全都消失没有了，求大神指导？

做原核蛋白诱导，用的PET32a载体，诱导后，用 His融合标签蛋白纯化试剂盒【HIS*BIND PURIFICATION KIT His】进行纯化，结果纯化后所有蛋白带全都没有了，求大神指导？

回复此楼

» 猜你喜欢

Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析已经有0人回复
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有255人回复
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析已经有0人回复
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点已经有0人回复
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂已经有0人回复
氢氧化钾活化操作已经有18人回复
散金已经有68人回复
生物质超级电容器已经有0人回复
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析已经有0人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

1楼 2016-09-05 15:24:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

antelopeyy

金虫 (小有名气)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 954.6
红花: 2
帖子: 134
在线: 28.1小时
虫号: 2052035
注册: 2012-10-09
性别: GG
专业: 色谱分析

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:32:33
肉肉-rourou: 金币+3 2016-11-03 14:02:03

你可以一步一步排查情况，确定目的蛋白的去向：
1.首先SDS-PAGE确定目的蛋白是否在上清液，如果在上清液中，则进入第二步；
2.进行蛋白纯化，对纯化的流穿液和最后收集的纯化浓缩液和离心得到的滤出液都进行SDS-PAGE电泳；
若第一步中上清中没有目的蛋白，则目的蛋白没有可溶表达，需考虑表达问题；若流穿液中有目的蛋白，则表示没有挂柱，需则需要改变挂柱条件；若在滤出液中有目的蛋白，则可能超滤管本身有问题，需更换；