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零星公寓

新虫 (小有名气)

[交流] PCR中的相关问题

今天PCR后跑电泳，第一个孔marker条带不清晰，而且marker也是新的。最后两个孔的阴性对照居然有条带，怎么回事呀？酶和水是新换的。请各位大神指点。谢谢！

PCR中的相关问题


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1楼 2016-08-11 16:30:33
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RNA世界

铁虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-16 07:59:25
这种情况我也经常遇到。这就是假阳性。有时候这很难消除的。提高退火温度、减少循环次数都是降低假阳性的途径。另外，你可以试着P一次内参看看，看看内参是否均一。而且从你的图看来其他的条带还是比阴性亮的啊
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谋事在人，成事在天
2楼2016-08-12 08:51:50
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零星公寓

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-16 07:59:38
引用回帖:
2楼: Originally posted by RNA世界 at 2016-08-12 08:51:50
这种情况我也经常遇到。这就是假阳性。有时候这很难消除的。提高退火温度、减少循环次数都是降低假阳性的途径。另外，你可以试着P一次内参看看，看看内参是否均一。而且从你的图看来其他的条带还是比阴性亮的啊

这个是今天刚刚跑到电泳，还是那样，不过条带比上次亮了。而且marker是不是降解了呀

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3楼2016-08-12 16:27:46
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零星公寓

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-16 08:00:42
PCR中的相关问题-1

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4楼2016-08-12 16:28:55
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零星公寓

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1 2016-08-16 08:00:47
引用回帖:
2楼: Originally posted by RNA世界 at 2016-08-12 08:51:50
这种情况我也经常遇到。这就是假阳性。有时候这很难消除的。提高退火温度、减少循环次数都是降低假阳性的途径。另外，你可以试着P一次内参看看，看看内参是否均一。而且从你的图看来其他的条带还是比阴性亮的啊

什么是内参啊？我刚刚接触分子，还望指点，谢谢

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5楼2016-08-12 16:37:09
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Alice 2016

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-16 08:00:53
你这个marker都分不清是哪个啊？
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怕什么真理无穷，进一寸有一寸的欢喜
6楼2016-08-15 14:57:32
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tangbowen

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-16 08:01:25
marker跑成这样，胶做的不好

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7楼2016-08-15 23:56:02
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零星公寓

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Alice 2016 at 2016-08-15 14:57:32
你这个marker都分不清是哪个啊？

第一个是marker

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8楼2016-08-16 10:11:58
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零星公寓

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tangbowen at 2016-08-15 23:56:02
marker跑成这样，胶做的不好

胶是1％的，做胶的时候应该注意什么吗？以前也是这么做的胶，marker也很清晰啊

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9楼2016-08-16 10:13:30
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tangbowen

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 零星公寓 at 2016-08-16 10:13:30
胶是1％的，做胶的时候应该注意什么吗？以前也是这么做的胶，marker也很清晰啊
...

多凝一会，建议15min以上

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10楼2016-08-16 12:41:47
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