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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体和目的片段太大连接问题
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jerry110

新虫 (小有名气)

[求助] 载体和目的片段太大连接问题 已有3人参与

各位亲，载体8000，目的片段6000，如何连接，求大神指教，谢谢！
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1楼 2016-07-19 09:27:58
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yjqhades

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2016-07-19 14:25:38
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
无缝连接一步搞定。
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3楼2016-07-20 17:42:40
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MMCCBB

新虫 (著名写手)
你打算用酶切还是同源重组的方法连接？

发自小木虫IOS客户端
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4楼2016-07-20 20:14:56
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匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
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5楼2016-07-25 22:42:42
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yjqhades at 2016-07-19 14:25:38
建议你试试天根生化的同源重组试剂盒，货号（VI201），把你的目的基因拆成两段（用PCR扩增），每段3KB，这样比较好连接。

我又不是神，你这么描述下我要是就知道哪出问题了，那我早就赚大钱啦⊙▽⊙
加油哈

发自小木虫Android客户端
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6楼2016-07-26 13:07:36
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781055707

木虫 (著名写手)
你这叫大呀，我1W都链过，载体100纳克，目的片段350纳克，双酶切，TAKARA的T4连接酶直接连，祝楼主好运吧。
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采菊东篱下，悠然见南山。
7楼2016-07-26 14:09:30
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liyangxie

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2016-07-20 17:42:40
无缝连接一步搞定。

你好 我有一个8000的片段 无缝连接的连接时间需要延长吗？
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8楼2018-03-12 12:04:08
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liyangxie

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pf790352975 at 2016-07-25 22:42:42
是吗  我有个8kb片段就是连不上 用无缝克隆 ，引物设计没问题，片段一次性扩增没测序 很特异 我怀疑是不是片断不是我要的东西呢？求指教...

请问你的8000片段后来使用什么方法连接的 我目前也在做这个8000的连接
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9楼2018-03-12 12:05:10
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