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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » BL21大肠杆菌质粒提取
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绿松石6727

新虫 (小有名气)

[求助] BL21大肠杆菌质粒提取 已有4人参与

师兄将pMAL转入了BL21类大肠杆菌中，我用氨苄抗性的培养基摇菌12小时后提质粒，浓度只能提到几十ng,请问表达蛋白的菌株是不是不适合做质粒提取？

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-07-14 14:37:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

守望海贝

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该和载体也有关系，不同质粒的拷贝数不一样，富集菌液提取也是一种方法
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5楼2016-07-15 09:54:20
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

12小时能提到几十ng已经很不错了。1.培养16-18小时；2.溶液3后，离心上清放在柱子里室温孵育时间延长；3.酒精洗的时候不洗第二次；4.洗脱时，EB孵育时间延长，可将EB加热至70度后使用。

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12楼2016-07-18 23:02:39
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普通回帖

Huobol

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-15 07:26:33
xn8008: 应助指数+1 2016-07-16 09:27:28
可以做3管或4管，每两三毫升过夜菌液一管，离心所得上清液分批次加到一个吸附柱中，这样浓度应该会多的吧。

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让羽毛再飞一会儿
2楼2016-07-14 18:03:31
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绿松石6727

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Huobol at 2016-07-14 18:03:31
可以做3管或4管，每两三毫升过夜菌液一管，离心所得上清液分批次加到一个吸附柱中，这样浓度应该会多的吧。

嗯，应该可以～

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3楼2016-07-14 19:11:47
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不爱做实验

银虫 (正式写手)
多摇一点菌液，多富集几次吧
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4楼2016-07-15 09:36:08
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梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-16 09:27:39
表达菌株拷贝量低，而且有背景质粒，既bl21自身的质粒，非常不建议用表达菌提质粒

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6楼2016-07-15 21:47:08
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不会的吧，我们也用BL21做感受态进行转化过，质粒浓度提出来和DH5a差不了太多~
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···
7楼2016-07-17 14:35:18
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)
摇时间长一点了，菌量多加一点,现在试剂盒提取来的量应该还好吧！

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8楼2016-07-18 12:11:05
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Super小新

新虫 (小有名气)
为什么不用克隆菌株嘞

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9楼2016-07-18 13:39:39
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花花贝

金虫 (知名作家)
载体的关系

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10楼2016-07-18 17:07:30
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