24小时热门版块排行榜    

查看: 3477  |  回复: 16

绿松石6727

新虫 (小有名气)

[求助] BL21大肠杆菌质粒提取 已有4人参与

师兄将pMAL转入了BL21类大肠杆菌中,我用氨苄抗性的培养基摇菌12小时后提质粒,浓度只能提到几十ng,请问表达蛋白的菌株是不是不适合做质粒提取?

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

守望海贝

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该和载体也有关系,不同质粒的拷贝数不一样,富集菌液提取也是一种方法
5楼2016-07-15 09:54:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Bioexperixgs

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

12小时能提到几十ng已经很不错了。1.培养16-18小时;2.溶液3后,离心上清放在柱子里室温孵育时间延长;3.酒精洗的时候不洗第二次;4.洗脱时,EB孵育时间延长,可将EB加热至70度后使用。

发自小木虫Android客户端
12楼2016-07-18 23:02:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

Huobol

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-15 07:26:33
xn8008: 应助指数+1 2016-07-16 09:27:28
可以做3管或4管,每两三毫升过夜菌液一管,离心所得上清液分批次加到一个吸附柱中,这样浓度应该会多的吧。

发自小木虫Android客户端
让羽毛再飞一会儿
2楼2016-07-14 18:03:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绿松石6727

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Huobol at 2016-07-14 18:03:31
可以做3管或4管,每两三毫升过夜菌液一管,离心所得上清液分批次加到一个吸附柱中,这样浓度应该会多的吧。

嗯,应该可以~

发自小木虫Android客户端
3楼2016-07-14 19:11:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)

多摇一点菌液,多富集几次吧
4楼2016-07-15 09:36:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-16 09:27:39
表达菌株拷贝量低,而且有背景质粒,既bl21自身的质粒,非常不建议用表达菌提质粒

发自小木虫Android客户端
6楼2016-07-15 21:47:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不会的吧,我们也用BL21做感受态进行转化过,质粒浓度提出来和DH5a差不了太多~
···
7楼2016-07-17 14:35:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bright8

铁杆木虫 (著名写手)

摇时间长一点了,菌量多加一点,现在试剂盒提取来的量应该还好吧!

发自小木虫Android客户端
8楼2016-07-18 12:11:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Super小新

新虫 (小有名气)

9楼2016-07-18 13:39:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花花贝

金虫 (知名作家)

10楼2016-07-18 17:07:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 绿松石6727 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化,一志愿:哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
信息提示
请填处理意见