| 查看: 3254 | 回复: 8 | ||
kingjazz23金虫 (小有名气)
|
[求助]
酿酒酵母感受态细胞电击转化 已有1人参与
|
|
各位师兄师姐大神好，我现在是研一的学生，因为本科完全没有接触过分子生物学的东西，我本科是读中药学的。导师安排我做萜类的异源表达，用的菌是酿酒酵母BY4741，我之前制备了感受态细胞，但是当时做的时候没有测最终的OD值，就开始做感受态了。后来做完后，就有Bio-rad的电转仪进行电转，然后涂板。在这个过程中，有些问题并不是很清楚，所以想请教一下你们： （1）制备酵母感受态细胞时，最终的OD值是不是一定要达到1.3~1.5之间？超过了会有什么影响？ （2）电转时，我选择的电击杯是0.2的，我参照protocol上写是0.2的电击杯加40u的感受态和5u的DNA样品，混合静置后加入电击杯中，发现量太少了，是不是需要调整一下感受态细胞的用量？还是需要加入山梨醇来增大体积？ （3）电击后，加入1ml的山梨醇，转移到无菌的EP管中后，是否需要孵育一段时间？之前做大肠杆菌的时候是需要孵育的，酵母的话是不是也需要？ （4）涂板后，一般需要多久时间才会长出菌落？一般菌落数是多少？ 问题比较多，希望各路大神帮忙解决一下，谢谢@天使托 |
回复此楼» 猜你喜欢
酰胺脱乙酰基
已经有9人回复
-
有时候真觉得大城市人没有县城人甚至个体户幸福
已经有3人回复
-
CSC & MSCA 博洛尼亚大学能源材料课题组博士/博士后招生｜MSCA经费充足、排名优
已经有5人回复
-
有70后还继续奋斗在职场上的吗？
已经有6人回复
-
博士延得我，科研能力直往上蹿
已经有7人回复
-
退学或坚持读
已经有27人回复
-
面上基金申报没有其他的参与者成吗
已经有5人回复
-
遇见不省心的家人很难过
已经有22人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 汉逊酵母电击转化不长啊有人能帮忙分析分析么！！
已经有3人回复
- 酿酒酵母的电转方法
已经有3人回复
- 酿酒酵母高效感受态制备
已经有5人回复
ls2046
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 52 (初中生)
- 金币: 25635.8
- 散金: 150
- 红花: 8
- 帖子: 3053
- 在线: 120小时
- 虫号: 350727
- 注册: 2007-04-21
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
2楼2016-07-12 11:58:32
kingjazz23
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 896.1
- 散金: 20
- 帖子: 261
- 在线: 83.1小时
- 虫号: 2581130
- 注册: 2013-08-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2016-07-12 18:43:40
kingjazz23
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 896.1
- 散金: 20
- 帖子: 261
- 在线: 83.1小时
- 虫号: 2581130
- 注册: 2013-08-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2016-07-16 15:24:18
ls2046
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 52 (初中生)
- 金币: 25635.8
- 散金: 150
- 红花: 8
- 帖子: 3053
- 在线: 120小时
- 虫号: 350727
- 注册: 2007-04-21
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
5楼2016-07-17 09:06:24
jldu0606
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 9357.6
- 红花: 8
- 帖子: 1544
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 333545
- 注册: 2007-03-28
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2016-07-28 11:33:22
dushangyun
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1151.5
- 散金: 105
- 红花: 4
- 帖子: 96
- 在线: 44.1小时
- 虫号: 3707373
- 注册: 2015-03-03
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
7楼2016-09-14 09:18:56
8楼2017-09-11 10:23:30
9楼2017-11-24 18:29:00