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kingjazz23金虫 (小有名气)
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酿酒酵母感受态细胞电击转化 已有1人参与
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各位师兄师姐大神好，我现在是研一的学生，因为本科完全没有接触过分子生物学的东西，我本科是读中药学的。导师安排我做萜类的异源表达，用的菌是酿酒酵母BY4741，我之前制备了感受态细胞，但是当时做的时候没有测最终的OD值，就开始做感受态了。后来做完后，就有Bio-rad的电转仪进行电转，然后涂板。在这个过程中，有些问题并不是很清楚，所以想请教一下你们： （1）制备酵母感受态细胞时，最终的OD值是不是一定要达到1.3~1.5之间？超过了会有什么影响？ （2）电转时，我选择的电击杯是0.2的，我参照protocol上写是0.2的电击杯加40u的感受态和5u的DNA样品，混合静置后加入电击杯中，发现量太少了，是不是需要调整一下感受态细胞的用量？还是需要加入山梨醇来增大体积？ （3）电击后，加入1ml的山梨醇，转移到无菌的EP管中后，是否需要孵育一段时间？之前做大肠杆菌的时候是需要孵育的，酵母的话是不是也需要？ （4）涂板后，一般需要多久时间才会长出菌落？一般菌落数是多少？ 问题比较多，希望各路大神帮忙解决一下，谢谢@天使托 |
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