| 查看: 3233 | 回复: 8 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
kingjazz23金虫 (小有名气)
|
[求助]
酿酒酵母感受态细胞电击转化 已有1人参与
|
|
|
各位师兄师姐大神好，我现在是研一的学生，因为本科完全没有接触过分子生物学的东西，我本科是读中药学的。导师安排我做萜类的异源表达，用的菌是酿酒酵母BY4741，我之前制备了感受态细胞，但是当时做的时候没有测最终的OD值，就开始做感受态了。后来做完后，就有Bio-rad的电转仪进行电转，然后涂板。在这个过程中，有些问题并不是很清楚，所以想请教一下你们： （1）制备酵母感受态细胞时，最终的OD值是不是一定要达到1.3~1.5之间？超过了会有什么影响？ （2）电转时，我选择的电击杯是0.2的，我参照protocol上写是0.2的电击杯加40u的感受态和5u的DNA样品，混合静置后加入电击杯中，发现量太少了，是不是需要调整一下感受态细胞的用量？还是需要加入山梨醇来增大体积？ （3）电击后，加入1ml的山梨醇，转移到无菌的EP管中后，是否需要孵育一段时间？之前做大肠杆菌的时候是需要孵育的，酵母的话是不是也需要？ （4）涂板后，一般需要多久时间才会长出菌落？一般菌落数是多少？ 问题比较多，希望各路大神帮忙解决一下，谢谢@天使托 |
回复此楼» 猜你喜欢
2025年遐想
已经有4人回复
-
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球
已经有8人回复
-
自然科学基金委宣布启动申请书“瘦身提质”行动
已经有4人回复
-
求个博导看看
已经有18人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 汉逊酵母电击转化不长啊有人能帮忙分析分析么！！
已经有3人回复
- 酿酒酵母的电转方法
已经有3人回复
- 酿酒酵母高效感受态制备
已经有5人回复
6楼2016-07-28 11:33:22