| 查看: 1742 | 回复: 3 | |||
[交流]
蛋白质凝胶电泳凝胶的制备 已有3人参与
|
|
一、材料与试剂 1、30%的丙烯酰胺：分别称取29g 丙烯酰胺，1g N,N -亚甲双丙烯酰胺加温热的去离子水60ml，加热至37℃溶解，补加水至终体积为100ml,过滤，即配成30%（w/v）丙烯酰胺贮存溶液。丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸，这一脱氨基反应是光催化或碱催化，故溶液的pH值不超过7.0，应置于棕色瓶中4℃保存。 2、10%十二烷基硫酸钠（SDS）：称取10gSDS加去离子水90ml加热至68℃，加几滴浓盐酸调节至pH7.2加水至100ml，即为10%（w/v）SDS。 3、浓缩胶缓冲液（1mol/L Tris-HCl pH 6.8）：12.12g Tris溶解在80ml去离子水中，用浓盐酸调节pH至6.8,再加去离子水至100ml。4℃保存。 4、分离胶缓冲液（1.5mol/L Tris-HCl pH 8.8）：18.16g Tris溶解在80ml去离子水中，用浓盐酸调节pH至8.8, 再加去离子水至100ml。4℃保存。 5、10%过硫酸胺（AP）：过硫酸胺提供催化丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所必需的自由基，可用去离子水配制小量10%（W/V）贮存液并4℃保存。由于过硫酸胺会缓慢分解，故应隔周新鲜配制。 6、TEMED（N ， N ， N, N -四甲基乙二胺）TEMED通过催化过硫酸胺形成自由基而加速丙烯酰胺和双丙烯酰胺的聚合，由于TEMED只能以游离碱的形式发挥作用，因此pH值较低时聚合反应受到抑制。 7、Tris-甘氨酸电泳缓冲液：分别称取15.1g Tris 和94g甘氨酸，溶解在900 ml去离子水中，然后加入50 ml 10%（w/v）SDS，再加去离子水至1000 ml则成5?贮存液。使用时稀释5倍，终浓度Tris为25mmol/L、甘氨酸为250mmol/L、0.1%SDS，缓冲液pH为（8.3）。 8、聚丙烯酰胺凝胶电泳槽和电泳仪 9、加样器和吸头等 二、操作方法 1、根据垂直电泳槽说明书安装玻璃板，确定需配制分离胶的浓度和体积，按“配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液”所列成分（见书末附录）配制所需分离胶； 2、迅速将分离胶注入两玻璃板间隙中，留出灌注积层胶所需空间（梳子的齿长再加1cm，用滴管小心地在分离胶上覆盖一层0.1% SDS（当丙烯酰胺浓度≤8%时）或异丁醇或水（当丙烯酰胺浓度≥10%时），覆盖层可防止氧扩散进入凝胶而抑制聚合反应。将凝胶垂直置于室温下； 3、分离胶聚合完全后，倒出覆盖层液体，用去离子水洗涤凝胶顶部数次以除去未聚合的丙烯酰胺，尽可能排除凝胶上的液体； 4、确定需配制浓缩胶的体积，按“配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液”（见书末附录）配制所需浓缩胶，然后直接将浓缩胶灌注在分离胶上，立即插入干净的配套梳子，避免气泡，然后加入浓缩胶溶液以充满梳子之间的空隙。待浓缩胶聚合后，拔出梳子，形成加样孔； 5、用去离子水将Tris-甘氨酸电泳缓冲液贮存液稀释5倍，倒入电泳槽，将加样孔充满，这时加样孔中的气泡可通过电泳缓冲液排除。 |
回复此楼» 猜你喜欢
071000生物学求调剂，初试成绩343
已经有3人回复
-
一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。
已经有6人回复
-
0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可
已经有7人回复
-
266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂
已经有3人回复
-
一志愿厦门大学化学学硕307求调剂
已经有7人回复
-
0703化学338求调剂！
已经有4人回复
-
284求调剂
已经有8人回复
-
总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂
已经有6人回复
-
生物学 296 求调剂
已经有6人回复
-
生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大豆提取蛋白质SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法
已经有2人回复
- 蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳
已经有3人回复
- 关于常规聚丙烯酰胺凝胶电泳样品的处理
已经有14人回复
- 聚丙烯酰胺凝胶电泳
已经有1人回复
- 凝胶电泳
已经有0人回复
- SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法—蛋白质的分子量测定
已经有2人回复
- 蛋白质SDS-丙烯酰胺凝胶电泳 连mark都没有跑动
已经有10人回复
- 聚丙烯酰胺凝胶电泳
已经有14人回复
- 蛋白质的凝胶电泳中泳道很明显但是条带不清楚的原因
已经有3人回复
- 聚丙烯酰胺凝胶电泳跑蛋白质
已经有4人回复
- 关于SDS-PAEG凝胶电泳前蛋白质要不要低温保藏？
已经有6人回复
- DNA 蛋白质 琼脂糖凝胶电泳的问题
已经有8人回复
- 【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
已经有16人回复
- 聚丙烯酰胺凝胶电泳问题的讨论
已经有17人回复
- 【资料】聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质技术实验分析
已经有125人回复
 |
2楼2016-07-06 14:02:33
jiafeijiafei
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1081.7
- 散金: 15
- 红花: 2
- 帖子: 143
- 在线: 41.8小时
- 虫号: 4783202
- 注册: 2016-06-19
- 性别: MM
- 专业: 蛋白质组学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
我想说有配套的试剂盒的，并且分离胶加到玻璃板内之后，可以加无水乙醇液封的。分离胶制好之后把无水乙醇倒掉，用滤纸条吸干，再加浓缩胶即可 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-07-07 20:20:59
4楼2016-07-08 00:09:05
