| 查看: 4461 | 回复: 9 | |||
sdjnyxn123银虫 (小有名气)
|
[求助]
请问蛋白镍柱纯化之后，elution buffer洗脱下来的蛋白跟之前没什么区别是怎么回事 已有5人参与
|
 是生工的这种镍柱  先用bind/wash buffer平衡2h 之后加入样品（大肠杆菌细胞破碎后的上清），静置半小时后，流出的液体是右边第二个泳道的 然后wash buffer洗脱两次 最后加入elution buffer，静置半小时后得到纯化样品 3个样品分别进行了SDS-PAGE看了一下 结果发现基本上没有什么太大的变化，还是那些杂蛋白 试剂盒时间有点长，14年买的，但是我再生过，不过bind/wash buffer和elution buffer没有处理过 是这两个的问题吗？ 一直纯化不成功，很苦恼，希望知道的朋友能够帮助一下！非常感谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有226人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2016-06-20 17:17:14
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:43:33
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:43:33
|
你没有做梯度洗脱么，可以优化一下洗脱条件，尽量分离开不同蛋白 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-06-20 17:30:04
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - 应助: 517 (博士)
- 金币: 462.9
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
4楼2016-06-21 10:22:33
5楼2016-06-21 14:43:13
tmoonday
金虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2999.9
- 散金: 10
- 红花: 2
- 帖子: 290
- 在线: 323小时
- 虫号: 1703018
- 注册: 2012-03-19
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:45:56
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:45:56
|
自己做梯度，咪坐浓度，40，100，150，200，250.试试，不用静置，直接洗脱，收集 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-06-23 00:10:21
7楼2016-06-24 17:38:28
夏天的普洱茶
木虫 (著名写手)
- 应助: 69 (初中生)
- 金币: 5116.5
- 红花: 18
- 帖子: 1048
- 在线: 441.4小时
- 虫号: 1427657
- 注册: 2011-10-05
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2016-06-25 00:49:26
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:46:14
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:46:14
|
his标签很麻烦的，最基础的纯化而已，不要以为可以纯得多干净，但也不至于这样子，先搞个梯度试试，剩下两三条杂带后可以用切gel的方法，his不可能纯的 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2016-06-25 01:26:24
10楼2016-06-25 01:30:31
