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sdjnyxn123银虫 (小有名气)
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[求助]
请问蛋白镍柱纯化之后，elution buffer洗脱下来的蛋白跟之前没什么区别是怎么回事 已有5人参与
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 是生工的这种镍柱  先用bind/wash buffer平衡2h 之后加入样品（大肠杆菌细胞破碎后的上清），静置半小时后，流出的液体是右边第二个泳道的 然后wash buffer洗脱两次 最后加入elution buffer，静置半小时后得到纯化样品 3个样品分别进行了SDS-PAGE看了一下 结果发现基本上没有什么太大的变化，还是那些杂蛋白 试剂盒时间有点长，14年买的，但是我再生过，不过bind/wash buffer和elution buffer没有处理过 是这两个的问题吗？ 一直纯化不成功，很苦恼，希望知道的朋友能够帮助一下！非常感谢！ |
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tmoonday
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:45:56
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:45:56
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自己做梯度，咪坐浓度，40，100，150，200，250.试试，不用静置，直接洗脱，收集 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-06-23 00:10:21
2楼2016-06-20 17:17:14
原海亮
木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:43:33
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:43:33
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你没有做梯度洗脱么，可以优化一下洗脱条件，尽量分离开不同蛋白 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-06-20 17:30:04
hc-material
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4楼2016-06-21 10:22:33