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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

[求助] 请问蛋白镍柱纯化之后,elution buffer洗脱下来的蛋白跟之前没什么区别是怎么回事 已有5人参与

请问蛋白镍柱纯化之后,elution buffer洗脱下来的蛋白跟之前没什么区别是怎么回事

是生工的这种镍柱

请问蛋白镍柱纯化之后,elution buffer洗脱下来的蛋白跟之前没什么区别是怎么回事-1

先用bind/wash buffer平衡2h
之后加入样品(大肠杆菌细胞破碎后的上清),静置半小时后,流出的液体是右边第二个泳道的
然后wash buffer洗脱两次
最后加入elution buffer,静置半小时后得到纯化样品

3个样品分别进行了SDS-PAGE看了一下
结果发现基本上没有什么太大的变化,还是那些杂蛋白

试剂盒时间有点长,14年买的,但是我再生过,不过bind/wash buffer和elution buffer没有处理过
是这两个的问题吗?

一直纯化不成功,很苦恼,希望知道的朋友能够帮助一下!非常感谢!
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:43:33
你没有做梯度洗脱么,可以优化一下洗脱条件,尽量分离开不同蛋白

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
3楼2016-06-20 17:30:04
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wochong

新虫 (小有名气)


原因有很多,可以看文章:蛋白纯化经验总结:http://www.detaibio.com/topics/qin-he-chun-hua-faq.html
2楼2016-06-20 17:17:14
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:44:04
层析缓冲液需要优化,层析过程也需要优化,比如梯度洗脱等。
4楼2016-06-21 10:22:33
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了了5123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:44:34
这种柱子都有配套的说明书的,按照上面配制梯度洗脱液,然后洗脱,就能分开有标签和没有标签的
5楼2016-06-21 14:43:13
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