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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 蛋白质纯化
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[交流] 蛋白质纯化 已有6人参与

亲们，有木有做过蛋白质纯化的呀。我包涵体用曲拉通、脲变性、透析过之后，总有白色物质析出，有木有影响啊？
我的透析袋是14000的，目的蛋白50000的。
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1楼 2016-06-02 14:09:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

super_mm

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-06 19:46:46
摸索合适的复性条件，稀释复性，柱上复性，你可以百度查查，另外复性溶液的pH、离子强度、表面活性剂都是可以摸索的，这工作量可不小。
你可以先试试稀释复性，把待复性的溶液放入透析袋里，把透析袋直接放入到100倍体积的复性缓冲液（不含变性剂的包涵体溶解液）中，静置放置几天，看看效果怎么样，应该会比你现在的有改善。
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凯伦爱佳佳
5楼2016-06-03 10:46:06
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baima

新虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-13 12:46:36
你是梯度透析吗？比如说，我纯化的蛋白样品是含8M尿素，我先用4M尿素的透析液，再换2M，再换1M，最后0M。复性过程切记不要过快，而且最好低温进行。我们一般都是在4度搅拌透析的

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在压力中坚持，在逆境中进步！
10楼2016-06-03 17:06:41
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普通回帖

super_mm

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是包涵体复性吗？透析去除变性剂吗？白色物质应该是未复性成功的蛋白吧，肯定有影响，析出越少越好啊，把复性后的上清测蛋白浓度和SDS-PAGE，看复性率多少
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2楼2016-06-02 14:58:23
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by super_mm at 2016-06-02 14:58:23
你是包涵体复性吗？透析去除变性剂吗？白色物质应该是未复性成功的蛋白吧，肯定有影响，析出越少越好啊，把复性后的上清测蛋白浓度和SDS-PAGE，看复性率多少

好的，我试试
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3楼2016-06-02 21:21:14
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by super_mm at 2016-06-02 14:58:23
你是包涵体复性吗？透析去除变性剂吗？白色物质应该是未复性成功的蛋白吧，肯定有影响，析出越少越好啊，把复性后的上清测蛋白浓度和SDS-PAGE，看复性率多少

是包涵体复性，是为了去除变性剂，我的析出来好多啊。复性率很低怎么办？
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4楼2016-06-03 10:30:31
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
送红花一朵
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5楼: Originally posted by super_mm at 2016-06-03 10:46:06
摸索合适的复性条件，稀释复性，柱上复性，你可以百度查查，另外复性溶液的pH、离子强度、表面活性剂都是可以摸索的，这工作量可不小。
你可以先试试稀释复性，把待复性的溶液放入透析袋里，把透析袋直接放入到100 ...

所以稀释复性是把待复性的溶液稀释了多少呢？
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6楼2016-06-03 12:03:53
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by super_mm at 2016-06-03 10:46:06
摸索合适的复性条件，稀释复性，柱上复性，你可以百度查查，另外复性溶液的pH、离子强度、表面活性剂都是可以摸索的，这工作量可不小。
你可以先试试稀释复性，把待复性的溶液放入透析袋里，把透析袋直接放入到100 ...

我就是把待复性的溶液倒到透析袋，直接放入50倍体积的复性透析液里面，16h换新的，然后就有很多的析出物，跑胶证明是蛋白
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7楼2016-06-03 13:07:51
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super_mm

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
说错了，这个方法是透析复性，不是稀释复性。这样的话你就得摸索透析液的成分了，这没什么固定的方法，只有不断的试才行。
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8楼2016-06-03 16:28:04
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by super_mm at 2016-06-03 16:28:04
说错了，这个方法是透析复性，不是稀释复性。这样的话你就得摸索透析液的成分了，这没什么固定的方法，只有不断的试才行。

好的，谢谢了，我也觉得是透析液的问题，可能不同的蛋白质透析液影响挺大的吧
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9楼2016-06-03 16:33:25
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