24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
查看: 1386  |  回复: 27

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[交流] 蛋白质纯化已有6人参与

亲们,有木有做过蛋白质纯化的呀。我包涵体用曲拉通、脲变性、透析过之后,总有白色物质析出,有木有影响啊?
我的透析袋是14000的,目的蛋白50000的。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

super_mm

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-06 19:46:46
摸索合适的复性条件,稀释复性,柱上复性,你可以百度查查,另外复性溶液的pH、离子强度、表面活性剂都是可以摸索的,这工作量可不小。
你可以先试试稀释复性,把待复性的溶液放入透析袋里,把透析袋直接放入到100倍体积的复性缓冲液(不含变性剂的包涵体溶解液)中,静置放置几天,看看效果怎么样,应该会比你现在的有改善。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2016-06-03 10:46:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baima

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-13 12:46:36
你是梯度透析吗?比如说,我纯化的蛋白样品是含8M尿素,我先用4M尿素的透析液,再换2M,再换1M,最后0M。复性过程切记不要过快,而且最好低温进行。我们一般都是在4度搅拌透析的

发自小木虫Android客户端
在压力中坚持,在逆境中进步!
10楼2016-06-03 17:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

super_mm

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你是包涵体复性吗?透析去除变性剂吗?白色物质应该是未复性成功的蛋白吧,肯定有影响,析出越少越好啊,把复性后的上清测蛋白浓度和SDS-PAGE,看复性率多少
2楼2016-06-02 14:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by super_mm at 2016-06-02 14:58:23
你是包涵体复性吗?透析去除变性剂吗?白色物质应该是未复性成功的蛋白吧,肯定有影响,析出越少越好啊,把复性后的上清测蛋白浓度和SDS-PAGE,看复性率多少

好的,我试试
3楼2016-06-02 21:21:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by super_mm at 2016-06-02 14:58:23
你是包涵体复性吗?透析去除变性剂吗?白色物质应该是未复性成功的蛋白吧,肯定有影响,析出越少越好啊,把复性后的上清测蛋白浓度和SDS-PAGE,看复性率多少

是包涵体复性,是为了去除变性剂,我的析出来好多啊。复性率很低怎么办?
4楼2016-06-03 10:30:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by super_mm at 2016-06-03 10:46:06
摸索合适的复性条件,稀释复性,柱上复性,你可以百度查查,另外复性溶液的pH、离子强度、表面活性剂都是可以摸索的,这工作量可不小。
你可以先试试稀释复性,把待复性的溶液放入透析袋里,把透析袋直接放入到100 ...

所以稀释复性是把待复性的溶液稀释了多少呢?
6楼2016-06-03 12:03:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by super_mm at 2016-06-03 10:46:06
摸索合适的复性条件,稀释复性,柱上复性,你可以百度查查,另外复性溶液的pH、离子强度、表面活性剂都是可以摸索的,这工作量可不小。
你可以先试试稀释复性,把待复性的溶液放入透析袋里,把透析袋直接放入到100 ...

我就是把待复性的溶液倒到透析袋,直接放入50倍体积的复性透析液里面,16h换新的,然后就有很多的析出物,跑胶证明是蛋白
7楼2016-06-03 13:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

super_mm

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
说错了,这个方法是透析复性,不是稀释复性。这样的话你就得摸索透析液的成分了,这没什么固定的方法,只有不断的试才行。
8楼2016-06-03 16:28:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by super_mm at 2016-06-03 16:28:04
说错了,这个方法是透析复性,不是稀释复性。这样的话你就得摸索透析液的成分了,这没什么固定的方法,只有不断的试才行。

好的,谢谢了,我也觉得是透析液的问题,可能不同的蛋白质透析液影响挺大的吧
9楼2016-06-03 16:33:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 凯伦爱佳佳 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见