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[求助]
PCR一直跑不出来，排除了该排除的原因了还是跑不出来 已有7人参与
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| 我最近在提取黑曲霉基因组DNA，克隆特定的葡萄糖氧化酶基因，但我的菌株是菌种保藏中心购买的标准菌株，不是克隆我需要的特定基因的特定菌株，我开始提的RNA，再反转录成CDNA跑PCR,退火温度跑的是55-65℃的梯度，用的10微升体系，没跑出来，后来又提的DNA,同样是跑的温度梯度，我需要的目的基因是1818bp，所以用的是高保真酶，引物也设计了好几对了，都是公司帮设计的，应该没问题，CDNA和DNA的浓度以及OD值都正常，但是不管用什么方法都跑不出来，求大神啊，真不知道该怎么办了，试验就卡在第一步了，好焦心呐！！！！！电泳图上除了marker就什么都没有了，有时候有引物二聚体 |
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yesucao
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【答案】应助回帖
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xn8008: 应助指数+1 2016-07-17 08:03:46
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xn8008: 应助指数+1 2016-07-17 08:03:46
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一般这种常见的基因没必要自己设计引物，搜索相关的文献均可以查找到设计好且条件成熟的引物，核对一下引物序列和扩增条件，没有问题就可以采用，我查找到的网站链接如下：http://www.docin.com/p-1350669733.html； 仅供楼主参考，以DNA为模板，建议反应体系加大到30ul，毕竟PCR扩增产物还是需要测序验证一下才行。 |
6楼2016-06-01 22:07:46
2楼2016-06-01 15:34:52
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5楼2016-06-01 15:46:30
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tangbowen
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9楼2016-06-02 11:57:02
030Selma
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-04 22:07:21
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先换酶试试，高保真也有不同品牌~或者先用非高保真的看能不能扩出来，还不能可能就是模板问题了 发自小木虫IOS客户端 |
10楼2016-06-02 12:20:11
