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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yghboy168

银虫 (小有名气)

[求助] pET28a异源表达蛋白切除His标签和T7标签的实验方法 已有3人参与

本人用pET28a异源表达某调控蛋白,要切除His标签和T7标签,以免标签影响蛋白与调控序列的结合,谁能提供相应的具体实验方法啊?谢谢!
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张林220

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hc-material at 2016-05-16 10:11:13
his标签可以用凝血酶切除,另一个不知道,切除后继续用镍柱把标签吸附,蛋白流穿。祝顺利

我的蛋白是His标签,切除标签之后,跟切前相比,切后理论分子量变化应该在1kD左右,但是SDS-PAGE结果显示,前后分子量变化很大,不知道是什么原因?想请教一下
7楼2018-01-23 15:44:26
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你要表达后才切除标签吗?表达后切除的话,需要特异的氨基酸序列,有些酶就识别这个序列。我这边用过。
2楼2016-05-14 23:15:11
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yghboy168

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-05-14 23:15:11
你要表达后才切除标签吗?表达后切除的话,需要特异的氨基酸序列,有些酶就识别这个序列。我这边用过。

是表达后要切除的,你能给我发一下如何切除和再次纯化收集目的蛋白的实验方法吗?非常感谢!
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3楼2016-05-15 17:49:29
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yghboy168: 金币+5, 有帮助 2016-05-16 16:31:49
his标签可以用凝血酶切除,另一个不知道,切除后继续用镍柱把标签吸附,蛋白流穿。祝顺利
4楼2016-05-16 10:11:13
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