24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4756  |  回复: 6

yghboy168

银虫 (小有名气)

[求助] pET28a异源表达蛋白切除His标签和T7标签的实验方法 已有3人参与

本人用pET28a异源表达某调控蛋白,要切除His标签和T7标签,以免标签影响蛋白与调控序列的结合,谁能提供相应的具体实验方法啊?谢谢!
回复此楼
眼内有尘三界窄,心头无事一床宽!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你要表达后才切除标签吗?表达后切除的话,需要特异的氨基酸序列,有些酶就识别这个序列。我这边用过。
2楼2016-05-14 23:15:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yghboy168

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-05-14 23:15:11
你要表达后才切除标签吗?表达后切除的话,需要特异的氨基酸序列,有些酶就识别这个序列。我这边用过。

是表达后要切除的,你能给我发一下如何切除和再次纯化收集目的蛋白的实验方法吗?非常感谢!
眼内有尘三界窄,心头无事一床宽!
3楼2016-05-15 17:49:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yghboy168: 金币+5, 有帮助 2016-05-16 16:31:49
his标签可以用凝血酶切除,另一个不知道,切除后继续用镍柱把标签吸附,蛋白流穿。祝顺利
4楼2016-05-16 10:11:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melyliang

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by yghboy168 at 2016-05-14 17:19:58
本人用pET28a异源表达某调控蛋白,要切除His标签和T7标签,以免标签影响蛋白与调控序列的结合,谁能提供相应的具体实验方法啊?谢谢!

你好,我现在也在做pET28a异源蛋白表达,蛋白也是调控蛋白,对于表达的调控蛋白活性测定,您有什么方法思路吗?研一小白一只,求指教

发自小木虫Android客户端
5楼2017-02-08 17:37:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melyliang

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by yghboy168 at 2016-05-14 17:19:58
本人用pET28a异源表达某调控蛋白,要切除His标签和T7标签,以免标签影响蛋白与调控序列的结合,谁能提供相应的具体实验方法啊?谢谢!

你好,我现在也在做pET28a异源蛋白表达,蛋白也是调控蛋白,对于表达的调控蛋白活性测定,您有什么方法思路吗?研一小白一只,求指教

发自小木虫Android客户端
6楼2017-02-08 17:37:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张林220

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hc-material at 2016-05-16 10:11:13
his标签可以用凝血酶切除,另一个不知道,切除后继续用镍柱把标签吸附,蛋白流穿。祝顺利

我的蛋白是His标签,切除标签之后,跟切前相比,切后理论分子量变化应该在1kD左右,但是SDS-PAGE结果显示,前后分子量变化很大,不知道是什么原因?想请教一下
7楼2018-01-23 15:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yghboy168 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 献血感触 +3 呀呀好傻 2026-05-19 3/150 2026-05-19 14:04 by jasswind
[论文投稿] Sci. Bull. 悲剧经验 +4 jyang1999 2026-05-16 4/200 2026-05-19 10:56 by maolC
[考博] 找博士生导师 +6 小代想上岸 2026-05-15 7/350 2026-05-19 10:22 by free_fisher
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +10 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 11/550 2026-05-19 10:03 by 嘻嘻哈哈乐呵呵
[基金申请] 同样的基金本子,换个专家直接从C变A! +3 国自然国社科中 2026-05-19 3/150 2026-05-19 08:50 by Equinoxhua
[基金申请] 别被青基扩招骗了!26年科研内卷才刚刚开始 +3 国自然国社科中 2026-05-14 4/200 2026-05-19 08:48 by archvillain
[考博] 云南大学材料与能源学院解琳课题组钙钛矿博士招生 +3 光伏爱好者 2026-05-17 4/200 2026-05-19 01:19 by 风起于浮萍
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[基金申请] 国自然上会要求 +5 无名者登山 2026-05-18 9/450 2026-05-18 17:50 by BlakeReary
[基金申请] 今年审到国自然15份,谈谈感受 +16 国自然国社科中 2026-05-17 16/800 2026-05-18 14:58 by gy116024
[基金申请] 青C资助名额大幅增加! +12 西葫芦炒鸡蛋 2026-05-13 16/800 2026-05-18 10:02 by Equinoxhua
[基金申请] 重磅!青年科学基金项目(C类)资助增幅预计超过50% +7 水和泥不是水泥 2026-05-13 10/500 2026-05-18 07:50 by 水和泥不是水泥
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
[文学芳草园] 半夜喝咖啡 +3 myrtle 2026-05-15 5/250 2026-05-18 01:03 by 小沈2018
[考博] 光量子物理方向 博士招生 1人(2026.09) +3 sandyworld 2026-05-15 4/200 2026-05-17 14:38 by sandyworld
[高分子] 本人最近太闲了,谁有问题可以提,每天会统一回复 +9 一切都是空工 2026-05-12 20/1000 2026-05-16 19:52 by Equinoxhua
[有机交流] 求助2,4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 6/300 2026-05-16 19:46 by Equinoxhua
[有机交流] 如何实现卤原子转化 +3 BT20230424 2026-05-15 5/250 2026-05-16 16:20 by czyzsu
[文学芳草园] 风把牡丹吹跑了 +5 myrtle 2026-05-12 9/450 2026-05-15 15:27 by myrtle
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
信息提示
请填处理意见