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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET28a异源表达蛋白切除His标签和T7标签的实验方法
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yghboy168

银虫 (小有名气)

[求助] pET28a异源表达蛋白切除His标签和T7标签的实验方法 已有3人参与

本人用pET28a异源表达某调控蛋白，要切除His标签和T7标签，以免标签影响蛋白与调控序列的结合，谁能提供相应的具体实验方法啊？谢谢！
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眼内有尘三界窄，心头无事一床宽！
1楼 2016-05-14 17:19:58
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你要表达后才切除标签吗？表达后切除的话，需要特异的氨基酸序列，有些酶就识别这个序列。我这边用过。
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2楼2016-05-14 23:15:11
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yghboy168

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-05-14 23:15:11
你要表达后才切除标签吗？表达后切除的话，需要特异的氨基酸序列，有些酶就识别这个序列。我这边用过。

是表达后要切除的，你能给我发一下如何切除和再次纯化收集目的蛋白的实验方法吗？非常感谢！
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眼内有尘三界窄，心头无事一床宽！
3楼2016-05-15 17:49:29
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yghboy168: 金币+5, ★有帮助 2016-05-16 16:31:49
his标签可以用凝血酶切除，另一个不知道，切除后继续用镍柱把标签吸附，蛋白流穿。祝顺利
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4楼2016-05-16 10:11:13
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melyliang

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by yghboy168 at 2016-05-14 17:19:58
本人用pET28a异源表达某调控蛋白，要切除His标签和T7标签，以免标签影响蛋白与调控序列的结合，谁能提供相应的具体实验方法啊？谢谢！

你好，我现在也在做pET28a异源蛋白表达，蛋白也是调控蛋白，对于表达的调控蛋白活性测定，您有什么方法思路吗？研一小白一只，求指教

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5楼2017-02-08 17:37:26
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melyliang

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by yghboy168 at 2016-05-14 17:19:58
本人用pET28a异源表达某调控蛋白，要切除His标签和T7标签，以免标签影响蛋白与调控序列的结合，谁能提供相应的具体实验方法啊？谢谢！

你好，我现在也在做pET28a异源蛋白表达，蛋白也是调控蛋白，对于表达的调控蛋白活性测定，您有什么方法思路吗？研一小白一只，求指教

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6楼2017-02-08 17:37:44
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张林220

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hc-material at 2016-05-16 10:11:13
his标签可以用凝血酶切除，另一个不知道，切除后继续用镍柱把标签吸附，蛋白流穿。祝顺利

我的蛋白是His标签，切除标签之后，跟切前相比，切后理论分子量变化应该在1kD左右，但是SDS-PAGE结果显示，前后分子量变化很大，不知道是什么原因？想请教一下
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7楼2018-01-23 15:44:26
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