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sherry_wang

木虫 (正式写手)

[交流] 荧光定量PCR引物设计原则

荧光定量PCR的引物设计原则是什么呢?原来做半定量PCR,按照普通引物设计原则进行设计,但是今天看下面这篇文献,发现文献中给出同一基因的荧光定量PCR和半定量PCR的引物不同,已知道半定量PCR引物不能用于荧光定量PCR,不知道按说明书上的荧光定量PCR引物设计能不能直接用来做半定量PCR?
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-YCZZ201603007.htm
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)


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引用回帖:
7楼: Originally posted by sherry_wang at 2016-04-27 22:31:04
我们以前做半定量的时候是直接用普通PCR仪扩增的产物去跑电泳,我看有杂志要求荧光定量数据和电泳图都要有,是用荧光定量的产物去跑的电泳吗?
另,引物二聚体那个解释清楚了,但是设计引物的时候,也会有软件评价 ...

你可以用荧光定量的产物跑电泳,关于二聚体,只是说有可能,软件评价不是万能的。
8楼2016-04-27 23:08:14
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
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sherry_wang: 金币+4 2016-05-14 15:58:08
两种定量方法使用的引物是不一样,不能通用。荧光定量引物除满足常规引物的条件,对PCR产物大小有限制,一般产物大小在90-250bp范围,这个产物如果用来做半定量,条带会和引物二聚体有重合,影响实际定量效果;而半定量一般产物在300-600bp之间。
2楼2016-04-26 21:13:20
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
sherry_wang: 金币+1 2016-05-14 15:58:22
DNAMAN里可以直接设计

发自小木虫Android客户端
3楼2016-04-26 23:44:05
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sherry_wang

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-04-26 21:13:20
两种定量方法使用的引物是不一样,不能通用。荧光定量引物除满足常规引物的条件,对PCR产物大小有限制,一般产物大小在90-250bp范围,这个产物如果用来做半定量,条带会和引物二聚体有重合,影响实际定量效果;而半 ...

谢谢 产物用来做半定量的意思是荧光定量的产物去跑条带吗?荧光定量引物二聚体是什么意思?
4楼2016-04-27 10:29:49
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