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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液pcr一直得不到目的条带
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w5239775hj

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液pcr一直得不到目的条带 已有4人参与

第一次菌液pcr如下图所示，第二次菌液pcr连条带都没有，问题到底出在哪里？？？

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-04-24 20:29:26
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鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)
菌液pcr一直得不到目的条带

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3楼2016-04-24 23:32:20
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鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)
菌液pcr一直得不到目的条带-1

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6楼2016-04-24 23:34:31
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leland2

新虫 (正式写手)
我做菌落PCR目的条带应该是700bp但是只有500bp怎么回事

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16楼2016-04-25 19:19:43
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普通回帖

鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)
怎么看不见图

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2楼2016-04-24 23:31:32
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鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)
菌液pcr一直得不到目的条带-2

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4楼2016-04-24 23:32:32
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鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)
这是我第一的图

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5楼2016-04-24 23:33:21
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鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)
这是学长帮我挑的菌做的，出来了，但是有很多条带，还不行，问了老师，老师让我提高退火温度试试，结果刚做完还不行

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7楼2016-04-24 23:36:13
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
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8楼2016-04-25 07:49:00
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804371539

铜虫 (小有名气)

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感谢参与，应助指数 +1
退火温度和PCR时的温度一样，你可以挑半个菌落做PCR啊，如果阳性就再挑另外半个摇菌。
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9楼2016-04-25 09:47:31
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菜头Q

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般来说，菌液PCR只是对重组质粒的一个初步鉴定，其结果的假阳性率很高。你可以挑菌到1.5mL EP管中，加入100 uL无抗性培养基摇1h，然后取1uL作为模板做PCR，电泳结果可能为阳性的继续扩就行了，但肯定逃不掉单克隆筛选这个重复性高、耗时长、劳动强度大的过程。你的PCR-电泳实验结果能说明的问题就是一组是有模板的，另一组没有模板。但是重点是你的实验目的是什么？鉴定连接结果还是转化结果？不说清楚得话感觉帮不上。
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10楼2016-04-25 11:21:28
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