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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液pcr一直得不到目的条带
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w5239775hj

新虫 (初入文坛)
菌液pcr一直得不到目的条带

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11楼2016-04-25 14:23:54
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w5239775hj

新虫 (初入文坛)
菌液pcr一直得不到目的条带-1

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12楼2016-04-25 14:28:15
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w5239775hj

新虫 (初入文坛)
这是我的图，之前点错图片了

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13楼2016-04-25 14:28:56
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CarlJH

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
10楼: Originally posted by 菜头Q at 2016-04-25 11:21:28
一般来说，菌液PCR只是对重组质粒的一个初步鉴定，其结果的假阳性率很高。你可以挑菌到1.5mL EP管中，加入100 uL无抗性培养基摇1h，然后取1uL作为模板做PCR，电泳结果可能为阳性的继续扩就行了，但肯定逃不掉单克隆 ...

不管你是通用引物还是特异引物，也不会假阳性率很高啊，有没有带一目了然

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14楼2016-04-25 14:55:16
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌落pcr鉴定还是蛮准的，一般情况下如果可以扩出来，大小对的话一般没有问题，pcr扩不出来的话，条件如果没问题，那应该是没连上或是假阳性，重新做~条件的话你可以做一个梯度pcr确定一下
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···
15楼2016-04-25 19:08:39
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leland2

新虫 (正式写手)
我做菌落PCR目的条带应该是700bp但是只有500bp怎么回事

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16楼2016-04-25 19:19:43
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菜头Q

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by CarlJH at 2016-04-25 14:55:16
不管你是通用引物还是特异引物，也不会假阳性率很高啊，有没有带一目了然
...

连接转化完做菌落PCR无论用什么引物，假阳性率都高。因为在菌落位置会有高拷贝数的没有被整合到载体上的目的片段，也会有连接成功但是没有成功转化的重组质粒。这是为什么要引入质粒PCR鉴定和双酶切鉴定。
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17楼2016-04-25 20:35:43
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半仙0356

新虫 (正式写手)
感觉marker没跑开～

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18楼2016-04-25 21:10:11
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mlxmiao

木虫 (著名写手)
一般没连上，产物一定要好

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19楼2016-04-25 21:46:20
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逍遥之乐缘

银虫 (正式写手)
还是用酶切坚定好点

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20楼2016-04-26 16:09:43
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