24小时热门版块排行榜    

查看: 6861  |  回复: 21

w5239775hj

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液pcr一直得不到目的条带 已有4人参与

第一次菌液pcr如下图所示,第二次菌液pcr连条带都没有,问题到底出在哪里???

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)

3楼2016-04-24 23:32:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)

6楼2016-04-24 23:34:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leland2

新虫 (正式写手)

我做菌落PCR目的条带应该是700bp但是只有500bp怎么回事

发自小木虫Android客户端
16楼2016-04-25 19:19:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)

2楼2016-04-24 23:31:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)

4楼2016-04-24 23:32:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)

5楼2016-04-24 23:33:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)

这是学长帮我挑的菌做的,出来了,但是有很多条带,还不行,问了老师,老师让我提高退火温度试试,结果刚做完还不行

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-04-24 23:36:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Eternity宇

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

8楼2016-04-25 07:49:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

804371539

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
退火温度和PCR时的温度一样,你可以挑半个菌落做PCR啊,如果阳性就再挑另外半个摇菌。
9楼2016-04-25 09:47:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

菜头Q

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般来说,菌液PCR只是对重组质粒的一个初步鉴定,其结果的假阳性率很高。你可以挑菌到1.5mL EP管中,加入100 uL无抗性培养基摇1h,然后取1uL作为模板做PCR,电泳结果可能为阳性的继续扩就行了,但肯定逃不掉单克隆筛选这个重复性高、耗时长、劳动强度大的过程。你的PCR-电泳实验结果能说明的问题就是一组是有模板的,另一组没有模板。但是重点是你的实验目的是什么?鉴定连接结果还是转化结果?不说清楚得话感觉帮不上。
10楼2016-04-25 11:21:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 w5239775hj 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +3 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-08 12:22 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +4 a089 2026-08-07 4/200 2026-08-08 12:15 by arzu_hma
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +10 且听虎啸 2026-08-07 13/650 2026-08-08 12:09 by sakura12139
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 08:59 by 6vVgjDL4CnGu
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:27 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:21 by 6vVgjDL4CnGu
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
请填处理意见