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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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w5239775hj

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液pcr一直得不到目的条带 已有4人参与

第一次菌液pcr如下图所示,第二次菌液pcr连条带都没有,问题到底出在哪里???

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)

3楼2016-04-24 23:32:20
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鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)

6楼2016-04-24 23:34:31
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leland2

新虫 (正式写手)

我做菌落PCR目的条带应该是700bp但是只有500bp怎么回事

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16楼2016-04-25 19:19:43
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普通回帖

鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)

2楼2016-04-24 23:31:32
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鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)

4楼2016-04-24 23:32:32
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鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)

5楼2016-04-24 23:33:21
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鱼鱼魏魏

新虫 (小有名气)

这是学长帮我挑的菌做的,出来了,但是有很多条带,还不行,问了老师,老师让我提高退火温度试试,结果刚做完还不行

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-04-24 23:36:13
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

8楼2016-04-25 07:49:00
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804371539

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
退火温度和PCR时的温度一样,你可以挑半个菌落做PCR啊,如果阳性就再挑另外半个摇菌。
9楼2016-04-25 09:47:31
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菜头Q

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般来说,菌液PCR只是对重组质粒的一个初步鉴定,其结果的假阳性率很高。你可以挑菌到1.5mL EP管中,加入100 uL无抗性培养基摇1h,然后取1uL作为模板做PCR,电泳结果可能为阳性的继续扩就行了,但肯定逃不掉单克隆筛选这个重复性高、耗时长、劳动强度大的过程。你的PCR-电泳实验结果能说明的问题就是一组是有模板的,另一组没有模板。但是重点是你的实验目的是什么?鉴定连接结果还是转化结果?不说清楚得话感觉帮不上。
10楼2016-04-25 11:21:28
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