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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 转基因PCR阳性检测
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

[求助] 转基因PCR阳性检测

PCR检测过程中，电泳后条带很杂，质粒都有两条带，后来加入DMSO，质粒条带正常，但检测结果依然很多杂带，并且有时候一个目的条带都没有，用了很多方法，还是不怎么好，杂带依然多，应该如何调整，减少杂带的干扰？
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1楼 2016-04-11 10:52:20
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ssswzf

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
退火温度可以适当提高一些
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2楼2016-04-11 11:35:43
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
来，上图吧，退火温度你做优化了么？模板是质粒？那应该特异性比较好才对

发自小木虫Android客户端
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天空才是极限，我有信心飞的更高！
3楼2016-04-11 12:23:20
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hlxxym

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、提高退火温度
2、降低体系镁离子浓度
3、减少循环数
4、重新设计引物，提高引物特异性
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4楼2016-04-11 12:39:23
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-11 12:23:20
来，上图吧，退火温度你做优化了么？模板是质粒？那应该特异性比较好才对

做了一个梯度，公司送过来的引物单上面的退火温度是59.8，我做了一个梯度，从56-62，但是只有56-58有带，就是不能消除杂带，但58以后的温度就没带了
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5楼2016-04-13 20:54:33
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssswzf at 2016-04-11 11:35:43
退火温度可以适当提高一些

现在是56-60退火温度下的质粒都能跑出来，但是目的基因却没有带了，今天用的58，之前用的56、57，感觉都不行，还有其他方法么
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6楼2016-04-14 16:25:33
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